[发明专利]一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物及其应用

权利要求书

1.一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物，其特征在于，所述组合物包括针对用于检测待检样品中分别与MTHFR和MTRR基因相关的特异性目的基因的引物对和探针，包括：

MTHFR677引物：

MTHFR677基因正向引物（MTHFR677-F）:SEQ ID NO.1；

MTHFR677基因反向引物（MTHFR677-R）:SEQ ID NO.2；

探针MTHFR677-CFP：SEQ ID NO.3；

探针MTHFR677-TFP：SEQ ID NO.4；

MTHFR1298引物对：

MTHFR1298基因正向引物（MTHFR1298-F）:SEQ ID NO.5；

MTHFR1298基因反向引物（MTHFR1298-R）: SEQ ID NO.6；

探针MTHFR1298-AF：SEQ ID NO.7；

探针MTHFR1298-CFP：SEQ ID NO.8；

MTRR66引物对：

MTRR66基因正向引物（MTRR66-F）：SEQ ID NO.9；

MTRR66基因反向引物（MTRR66-R）：SEQ ID NO.10；

探针MTRR66-AFP: SEQ ID NO.11；

探针MTRR66-GFP: SEQ ID NO.12；

内标引物对：

HER2-F: SEQ ID NO.13；

HER2-R: SEQ ID NO.14；

探针HER2-FP: SEQ ID NO.15；

其中对MTHFR677-CFP、MTHFR1298-AF和MTRR66-AFP的5，端进行FAM修饰，3，端进行BHQ1修饰；对MTHFR677-TFP、MTHFR1298-CFP和MTRR66-GFP的5，端进行ROX修饰，3，端进行BHQ2修饰；对HER2-FP的5，端进行HEX修饰，3，端进行BHQ1修饰；

在MTHFR677-CFP序列的第13位碱基C上增加锁核酸（LNA）的修饰；

在MTHFR677-TFP序列的第13位碱基T上增加锁核酸（LNA）的修饰；

在MTHFR1298-AF序列的第13位碱基A上增加锁核酸（LNA）的修饰；

在MTHFR1298-CFP序列的第13位碱基C上增加锁核酸（LNA）的修饰；

在MTRR66-AFP序列的第15位碱基A上增加锁核酸（LNA）的修饰；

在MTRR66-GFP序列的第14位碱基G上增加锁核酸（LNA）的修饰；

一人份加入量为：MTHFR677-F加入量0.1-0.3μL，MTHFR1298-F加入量0.1-0.3μL，MTRR66-F加入量0.1-0.3μL，MTHFR677-R加入量0.1-0.3μL，MTHFR1298-R加入量0.1-0.3μL，MTRR66-R加入量0.1-0.3μL，MTHFR677-CFP加入量0.01-0.2μL，MTHFR1298-AFP加入量0.01-0.2μL，MTRR66-AFP加入量0.01-0.2μL，MTHFR677-TFP加入量0.01-0.2μL，MTHFR1298-CFP加入量0.01-0.2μL，MTRR66-GFP加入量0.01-0.2μL，HER2-F加入量0.01-0.2μL，HER2-R加入量0.01-0.2μL，HER2-FP加入量0.01-0.2μL。

2.根据权利要求1所述的用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物在制备用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的试剂中的应用。

3.一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物。

4.根据权利要求3所述的用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括DNA聚合酶、dNTPs、10×DNA聚合酶buffer、UDG酶和Mg2+，一人份加入量为：DNA聚合酶加入量0.1-0.4μL，dNTPs加入量1-3μL，10×DNA聚合酶buffer 加入量1-4μL，UDG酶加入量0.01-0.2μL，Mg2+加入量2-5μL。