[发明专利]一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物及其应用，通过FAM、HEX、ROX(修饰)三通道多重PCR反应对MTHFR和MTRR基因中的单核苷酸多态性位点进行检测。为了提高检测的简便性和特异性，通过探针分型的技术手段实现一管分型检测，使得整个操作以及反应过程简单化，并在此基础上，对探针进行锁核酸修饰和二级结构修饰，增加探针的Tm值，进一步提高探针结合的特异性的，最后通过调整引物对的配比、Taq酶的用量、镁离子的用量等，提高整个试剂盒的最低检测限、准确性和特异性，试剂盒最低检测浓度能够达到1ng/μL，准确性和特异性均能够达到100％。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的技术。

背景技术

叶酸是一种水溶性B族维生素，因最初从菠菜叶中提取得到，故称为叶酸。叶酸是合成核酸所必须的元素，是细胞生长和组织修复所必需的物质，更是胚胎发育过程中不可缺少的营养素。近年来大量研究已经证实，叶酸缺乏是导致出生缺陷的主要原因。叶酸的临床功能除了预防胎儿神经管缺陷外，还能降低孕妇妊娠高血压、自发性流产和胎儿宫内发育迟缓、早产以及新生儿低出生体重等发病率。

机体缺乏叶酸有两个方面的原因：一是叶酸摄入量不足，二是由于遗传(基因)突变导致机体对叶酸的利用能力低下。前者通过多食用富含叶酸食物，或适量补充叶酸制剂即可满足机体需求；而携带相关基因突变的人群，即使按常量补充叶酸，也不能满足机体代谢所需。叶酸代谢基因的差异，决定了叶酸利用能力的不同，因此，叶酸补充剂量应因人而异。

参与叶酸代谢最重要的两个基因是亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶还原酶基因(MTRR)。研究发现，MTHFR的活性与C677T和A1298C基因位点有关；MTRR的活性与A66G基因位点有关。当基因位点发生突变时就会导致MTHFR和MTRR活性下降，进而引起叶酸利用能力不足，宝宝出生缺陷风险增加。

中国人群中存在一定比例的风险型基因----78％的国人存在叶酸利用能力相关基因突变，导致不同人对叶酸的利用能力不同，所以叶酸补充需要个性化。

因此，MTHFR和MTRR基因多态性检测对于叶酸补充剂量有重要意义。而目前检测MTHFR和MTRR基因多态性的核苷酸引物及方法准确性和特异性较低，难以在临床广泛应用。所以探索一种检测MTHFR和MTRR基因多态性快速可靠的核苷酸引物组及方法已经成为临床实验研究的热点问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物及其应用，通过调整引物的配比、Taq酶的用量和镁离子的用量等，通过FAM、HEX、ROX(修饰)三通道多重PCR反应，并且将引物放置到一管内分型检测，提高检测的简便性和特异性，使得整个操作以及反应过程简单化。并在此基础上，对探针进行锁核酸修饰和二级结构修饰，增加探针的Tm值，进一步提高探针结合的特异性的，最后通过上述体系的调整，使得准确性和特异性均能够达到100％，最低检测浓度能够达到1ng/μL，解决了以往检测MTHFR和MTRR基因多态性时准确性和特异性较低的问题。

为了实现上述目的，本发明提供的一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物，包括分别针对用于检测待检样品中与MTHFR和MTRR基因相关的特异性目的基因的引物对，包括：

MTHFR677引物：

MTHFR677基因正向引物(MTHFR677-F):AACAGGTGGAGGCCAGCCT(SEQ ID NO.1)；

MTHFR677基因反向引物(MTHFR677-R):GTGCGGTGAGAGTGGGGTG(SEQ ID NO.2)；

MTHFR677-CFP：FAM-TGAAAGCGGGAGCCGATTTCA-BHQ1(SEQ ID NO.3)；