[发明专利]基于DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值鉴别新鲜牛奶和复原牛奶的方法有效
| 申请号： | 201710708129.1 | 申请日： | 2017-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN107365857B | 公开（公告）日： | 2020-07-28 |
| 发明（设计）人： | 刘永峰;廖晶 | 申请（专利权）人： | 陕西师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;G01N27/447 |
| 代理公司： | 西安永生专利代理有限责任公司 61201 | 代理人： | 高雪霞 |
| 地址： | 710062 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 dna 凝胶电泳 mtdna ndna 鉴别 新鲜 牛奶 复原 方法 | ||
1.一种基于DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值鉴别新鲜牛奶和复原牛奶的方法，其特征在于它由以下步骤组成：
(1)从待测样品中提取牛基因组DNA；
(2)设计并合成牛线粒体DNA上的12S rRNA基因的特异性引物：
上游引物：5’-CGC GGT CAT ACG ATT AAC CC-3’
下游引物：5’-AAC CCT ATT TGG TAT GGT GCT T-3’
(3)设计并合成牛核DNA上的β-globin基因的特异性引物：
上游引物：5’-CGG CGG CGG GCG GCG CGG GCT GGG CGG GAA GGC CCA TGG CAA GAAGG-3’
下游引物：5’-GCC GGC CCG CCG CGC CCG TCC CGC CGC TCA CTC AGC GCA GCA AAGG-3’
(4)对步骤(1)提取的牛基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳，根据各自电泳条带的差异，对待测样品进行初步定性：DNA琼脂糖凝胶电泳图条带亮且无拖尾及弥散现象，说明待测样品是新鲜牛奶，DNA琼脂糖凝胶电泳图条带稍暗且拖尾及弥散现象严重，说明待测样品为复原牛奶；
(5)采用步骤(1)提取的牛基因组DNA为模板，分别对步骤(2)和(3)的特异性引物进行实时荧光定量PCR扩增，同时扩增12S rRNA基因和β-globin基因，获得各自的Ct值，根据公式mtDNA:nDNA＝2-(Ct12SrRNA-Ctβ-globin)计算出mtDNA:nDNA值，当mtDNA:nDNA值为20～100，说明待测样品为新鲜牛奶，当mtDNA:nDNA值为120～2000，说明待测样品为复原牛奶；
结合上述步骤(4)和(5)的检测结果即可实现新鲜牛奶和复原牛奶的准确鉴别。
2.根据权利要求1所述的基于DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值鉴别新鲜牛奶和复原牛奶的方法，其特征在于：在步骤(5)中，所述PCR扩增的条件为：95℃预变性10min；95℃变性30s，60℃退火1min，72℃延伸1min，40个循环。
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