[发明专利]基于DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值鉴别新鲜牛奶和复原牛奶的方法

说明书

本发明公开了一种基于DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值鉴别新鲜牛奶和复原牛奶的方法，该方法首先从待测牛奶样品中提取牛基因组DNA，然后对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析，根据所提取的DNA条带对待测样品进行初步定性。然后再利用实时荧光定量PCR技术，同时扩增提取的牛基因组DNA的线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)，进而计算出mtDNA:nDNA值，根据该值的大小可以进一步确定待测样品为新鲜牛奶还是复原牛奶。本发明为牛奶品质的检测与评价提供了一种新方法，也为企业生产高品质奶产品提供参考，应用前景广阔，对于牛奶的营养品质检测具有重要的意义。

技术领域

本发明属于食品品质检测技术领域，具体涉及一种DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值鉴别新鲜奶和复原奶的方法。

背景技术

近年来，乳及乳制品品质和安全问题层出不穷，已经越来越受到消费者的关注。生产出高品质的乳制品离不开优质的原料，因此确保原材料的品质就显得尤为重要。目前国内的奶制品消费主要为UHT奶，国家标准明确规定，UHT奶的生产原料可以为新鲜奶或复原奶，但在商品包装上必须明确标注使用的原材料名称，但是仍然有少部分不法商家使用复原奶生产UHT奶之后没有明确标注，严重侵害消费者的权益，因此建立一种稳定可靠的新鲜乳和复原奶鉴别方法尤为重要。

目前检测复原奶的最主要的方法是高效液相色谱法测定其中糠氨酸的含量，从而鉴别出复原奶，我国农业部颁发的标准中明确规定：巴氏消毒奶中每100克蛋白质中糠氨酸含量大于12毫克时，可以判定该产品中含有复原奶。但是单单利用该项指标进行判定，往往可能会出现假阳性的结果，比如奶制品在存放过程中糠氨酸含量可能会增加，因此建立新的复原奶鉴别方法就势在必行。

近年来，分子生物学技术已成为奶产品质量检测和分子营养研究的有力工具。利用分子生物学的方法进行牛奶品质的鉴定已经成为一种趋势。众所周知，DNA是一种热敏性的生物大分子，食品在加工过程中往往会经过加热处理，这就会对DNA造成一定的影响。比如奶粉就是牛奶经过巴氏消毒、均质、喷雾干燥等一系列工艺生产而来，在经过加入一定比例的水调和成复原奶，这就造成了新鲜奶和复原奶在DNA品质上的差异。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对现有技术鉴别新鲜奶和复原奶的缺陷和不足，提供一种检测效率高、实用性强、基于DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值差异来鉴定新鲜乳和复原奶的方法。

解决上述技术问题所采用的技术方案由以下步骤组成：

1、从待测样品中提取牛基因组DNA。

2、设计并合成牛线粒体DNA上的12S rRNA基因的特异性引物：

上游引物：5’-CGC GGT CAT ACG ATT AAC CC-3’

下游引物：5’-AAC CCT ATT TGG TAT GGT GCT T-3’

3、设计并合成牛核DNA上的β-globin基因的特异性引物：

上游引物：5’-CGG CGG CGG GCG GCG CGG GCT GGG CGG GAA GGC CCA TGG CAAGAA GG-3’

下游引物：5’-GCC GGC CCG CCG CGC CCG TCC CGC CGC TCA CTC AGC GCA GCAAAG G-3’

4、对步骤1提取的牛基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳，根据各自电泳条带的差异，对待测样品进行初步定性：DNA琼脂糖凝胶电泳图条带亮且无拖尾及弥散现象，说明待测样品是新鲜牛奶，DNA琼脂糖凝胶电泳图条带稍暗且拖尾及弥散现象严重，说明待测样品为复原牛奶。