[发明专利]一种人细胞色素CYP2C19和ABCB1基因多态性位点检测试剂盒及用途

说明书

本发明提供了一种人细胞色素CYP2C19和ABCB1基因多态性位点检测试剂盒及用途，所述检测试剂盒采用依据细胞色素P450CYP2C19*2：rs4244285；CYP2C19*3：rs4986893；CYP2C19*17：rs12248560和ABCB1:rs4148727,共2个基因的的4个多态性位点的核苷酸序列合成引物及探针，进行实时荧光定量等位基因探针检测，判断待测目标是否属于用药易感人群。使用该方法，可以进行临床用药方案的指导及调整，为临床个性化治疗提供依据，预防药物的不良反应。本方法可同时对2个基因的4个多态性位点同时检测，具有简便、准确、快速、高通量等优点。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地涉及一种人细胞色素P450 CYP2C19和ABCB1基因多态性位点检测试剂盒及用途。

背景技术

缺血性心脏病和缺血性脑卒中是世界卫生组织(WHO)公布的全球死因的首要两位，动脉粥样硬化、斑块破裂、血栓形成是心脑血管事件发生的直接原因，而血栓性疾病已成为人类健康的第一杀手，抗血小板治疗是预防血栓性疾病的主要手段。

斑块破裂和血栓形成是导致急性心血管事件的基本病理改变,抗栓尤其是抗血小板治疗是急性冠脉综合征最重要的干预措施。血小板无细胞核、是产生于骨髓巨核细胞胞浆的碎片。其在循环中的最大生存周期约10d。在正常情况下,血小板在血液循环中处于非激活状态,而当血管内皮损伤或是动脉粥样硬化斑块破裂、内皮下的基质暴露、出现活化因子时,血小板即可被激活并在生理止血过程中起重要作用。

抗血小板药物就是针对血小板激活的各个环节和相关靶点研发而成的,在机制上可作用于血小板激活、黏附、聚集的各个阶段。

目前主要使用的药物有：

环氧化酶(COX)抑制剂：阿司匹林可促进COX-1活性部位第529位丝氨酸乙酰化,不可逆抑制COX-1的活性。COX-1在前列腺素类生物合成的初始步骤中起着关键作用,它可催化花生四烯酸转化为前列腺素H2(PGH2),而PGH2是TXA2的直接前体。阿司匹林抑制COX-1的结果是导致TXA2生成减少,而TXA2是强烈的血小板致聚物,TXA2生成减少终影响到血小板的聚集和释放反应。

ADP受体抑制剂：氯吡格雷。该药物口服后在小肠吸收,受到ABCB1基因编码的质子泵P-糖蛋白调控,吸收后85％－95％被羧化酶水解为非活性的羧酸类代谢产物SR26334,仅10％－15％经肝脏细胞色素P450(CYP450)酶系代谢为活性产物。氯吡格雷活性代谢产物R-130964在经过肝脏循环时通过共价键不可逆地和血小板表面的ADP受体(P2Y12)结合,阻断ADP对腺苷酸环化酶的抑制作用,促进cAMP依赖的VASP磷酸化,抑制纤维蛋白原与血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体结合,进而抑制血小板的聚集。此外,氯吡格雷还能阻断继发的ADP介导的糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物的活化后引起的血小板活化扩增,从而抑制其他激动剂诱导的血小板聚集。

由于氯吡格雷必须经生物转化为活性产物才能抑制血小板的聚集。该生物转化过程需CYP2C19基因编码的细胞色素P450在肝内代谢完成，活性产物能选择性地、不可逆地阻断二磷酸腺苷依赖的血小板聚集。

不同个体对于氯吡格雷具有不同的反应性，约有40％的亚裔病人在治疗后仍显示出残留的血小板聚集，即所谓的“氯吡格雷抵抗”。其主要原因是CYP2C19*2，CYP2C19*3CYP2C19基因突变致使氯吡格雷的活性代谢产物减少导致的。最新临床研究结果证实CYP2C19基因突变所导致的弱代谢个体，其栓塞重新形成的风险增加，心脑血管事件的发生风险增加，病死率升高。对于CYP2C19基因突变的个体，需要增加氯吡格雷的剂量(负荷剂量为300mg或600mg)，以达到阻断血小板聚集的效果。