[发明专利]环二肽cyclo‑(S)‑pro‑(S)‑phe在防治青枯病和/或稻瘟病中的应用在审
申请号: | 201710719035.4 | 申请日: | 2017-08-21 |
公开(公告)号: | CN107467024A | 公开(公告)日: | 2017-12-15 |
发明(设计)人: | 邓音乐;宋施豪;付书娜;孙秀云;邓海飞;叶佩仪 | 申请(专利权)人: | 华南农业大学 |
主分类号: | A01N37/46 | 分类号: | A01N37/46;A01P3/00;C12P21/04;C12R1/19 |
代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司44245 | 代理人: | 苏运贞 |
地址: | 510642 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 二肽 cyclo pro phe 防治 青枯病 稻瘟病 中的 应用 | ||
技术领域
本发明属于植物病害防治领域,特别涉及环二肽cyclo-(S)-pro-(S)-phe在防治青枯病和/或稻瘟病中的应用。
背景技术
植物细菌性青枯病是由青枯劳尔氏菌Ralstonia solanacearum引起的一种维管束毁灭性土传细菌性病害,在亚热带、热带和温带地区发生普遍系统侵染的毁灭性土传病害,俗称“植物瘟病”。青枯劳尔氏菌寄主广泛,可侵染54个科的450余种植物。目前,细菌性青枯病的防治是世界公认的一大难题,它广泛分布于世界各地,在我国南方省市发生严重,尤其在浙江,近年来不但茄科、瓜类受害,大面积发生的桑青枯病更对蚕业生产造成严重损失。
青枯菌有很多小种,根据青枯菌的寄主范围分为5个生理小种,小种1主要危害多数茄科植物,包括番茄、马铃薯、茄子和烟草等,还危害其他科植物;小种2能侵染香蕉、海里康(Heliconais)和大蕉等植物;小种3主要危害马铃薯,也可弱侵染烟草和番茄;小种4侵染姜以及弱侵染马铃薯等其他植物。另有研究人员将从我国南方桑树上分离到的青枯病菌株命名为小种5。侵染马铃薯的青枯病菌主要是小种l和小种3。
目前,青枯病的防治方法主要有加强田间管理、培育抗病品种、使用化学药剂和施用生防菌剂等,但实践证明,田间管理难以有效控制青枯病发生,抗性材料的选育耗时长,而化学防治污染环境、破坏生态平衡,且化学药剂的长期使用易使病原菌产生抗药性。
稻瘟病又称稻热病、火烧瘟、叩头瘟。分布在全国各稻区,主要为害叶片、茎秆、穗部。因为害时期、部位不同分为苗瘟、叶瘟、节瘟、穗颈瘟、谷粒瘟。苗瘟发生于三叶前,由种子带菌所致。病苗基部灰黑,上部变褐,卷缩而死,湿度较大时病部产生大量灰黑色霉层,即病原菌分生孢子梗和分生孢子。稻瘟病是水稻的重要病害之一,与水稻纹枯病、水稻稻曲病、水稻病毒病并称水稻四大病害,该病分布广泛,全世界约有80余个国家和地区发生此病,我国南北稻区也均有发生。病害流行地区,一般减产10%~20%,严重时可达40%~50%,特别重的田块甚至颗粒无收。稻瘟病菌主要依靠孢子传播,所以抑制稻瘟病菌的孢子产生对防治稻瘟病有重要意义。
因此,有必要寻找一种更为高效的防治青枯病和稻瘟病的化合物。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足,提供环二肽cyclo-(S)-pro-(S)-phe)在防治青枯病和/或稻瘟病中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现:环二肽cyclo-(S)-pro-(S)-phe在防治青枯病和/或稻瘟病中的应用,其中,环二肽cyclo-(S)-pro-(S)-phe的结构式如式I所示:
所述的环二肽cyclo-(S)-pro-(S)-phe可进行化学合成,或是通过如下步骤制备得到:
(1)将大肠埃希氏菌GZ-34进行发酵,得到的发酵液进行固液分离;在得到的上清液中加入乙酸乙酯进行萃取,收集上层有机相,经旋转蒸发后溶解在甲醇中,用孔径为0.22μm的滤膜去除不溶物,得到含活性成分的有机溶液I;
(2)用葡聚糖凝胶LH-20装柱,将含活性成分的有机溶液I上样,通过葡聚糖凝胶LH-20吸附活性成分;再用甲醇洗脱,每收集250ml甲醇洗脱液为一个组分;收集第3个组分,经过旋转蒸发后溶解在甲醇中,过0.22μm的滤膜去除不溶物;
(3)对步骤(2)去除不溶物的馏分3进行半制备高效液相层析;其中,溶剂A相为0.1%(v/v)甲酸,溶剂为色谱纯水;溶剂B相为色谱纯乙腈;洗脱程序为33%B相恒梯度洗脱,3.0mL×min-1,收集第12-15min的洗脱液,冻干,得到环二肽cyclo-(S)-pro-(S)-phe。
步骤(1)中所述的大肠埃希氏菌GZ-34,保藏编号为CCTCC NO:M 2016353,于2016年6月27日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心,已在中国专利申请CN 105969707 A公开。
步骤(1)中所述的发酵所用的发酵培养基优选为LB培养基。
所述的LB培养基的组成如下:蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L,pH7.0~7.2。
步骤(1)中所述的发酵的条件优选为于35~37℃,200~250rpm发酵;更优选为于37℃、220rpm发酵。
步骤(1)中所述的发酵的程度优选为达到大肠埃希氏菌的对数生长期或稳定期;更优选为OD600=3。
步骤(1)中所述的固液分离的方式优选为离心。
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