[发明专利]一种检测转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器及其检测方法

权利要求书

1.一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器，其特征在于，所述荧光化学传感器包括：转录因子NF-κBp50结合探针和辅助探针；

其中，转录因子NF-κBp50结合探针由一个p50-s探针与p50反探针杂化组成，p50-s探针与p50反探针序列上有两个不相邻的转录因子识别位点，所述p50-s探针转录因子识别位点序列为5'-GGG ACT TTC C-3'，两个转录因子识别位点之间的存在磷酸二酯键为硫代修饰；所述p50-s探针与p50反探针上均设计有2-氨基嘌呤荧光基；所述p50-s探针与p50反探针5'端的磷酸二酯键均为硫代修饰；

所述辅助探针为与p50-s探针、p50反探针近5'端的部分碱基序列互补。

2.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器，其特征在于，所述荧光化学传感器还包括核酸外切酶III，Nb.BtsI内切酶，λ核酸外切酶和KF聚合酶。

3.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器，其特征在于，所述p50-s探针长度为66nt，所述p50-s探针的碱基序列为：5'-A*A*A ACT CAC TGCACT CGA TCG GAC AGA TGG GAC TTT CCT TGA TA*G*GAC CTG GGG GAC TTT CCAATA-3'，其中，*代表硫代修饰，A代表2-氨基嘌呤取代碱基。

4.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器，其特征在于，所述p50反探针长度为66nt，所述p50反探针的碱基序列为：5'-A*A*A ACT CAC TGCACT CGA TCG GAC TAT TGG AAA GTC CCC CAG GT*C*CTA TCA AGG AAAGTC CCA TCT-3'，其中，*代表硫代修饰，A代表2-氨基嘌呤取代碱基。

5.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器，其特征在于，所述辅助探针长度为16nt，所述辅助探针的碱基序列为：5'-T*TC GAT CGA GTG CA*C*A-3'，其中，*代表硫代修饰。

6.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器，其特征在于，所述荧光化学传感还包括转录因子NF-κBp50结合探针和NF-κBp50结合时的反应缓冲液，所述反应缓冲液包括：10毫摩尔每升pH值为7.5的Tris-HCl缓冲液，100毫摩尔每升氯化钾，2毫摩尔每升氯化镁，0.1毫摩尔每升乙二胺四乙酸，0.1毫克每毫升的酵母tRNA，10％甘油，0.25毫摩尔每升二硫苏糖醇。

7.权利要求1-6任一项所述荧光化学传感器用于检测转录因子NF-κBp50的方法，其特征在于，具体包括：

1)将待测样品加入所述转录因子NF-κBp50结合探针反应溶液中孵育反应，而后加入外切酶III进行消化；

2)向步骤1)消化后溶液中加入dNTP，KF聚合酶，Nb.BtsI内切酶，λ核酸外切酶进行孵育反应；

3)对步骤2)孵育反应后的溶液中的荧光光谱进行检测，实现对待测样品中的转录因子NF-κBp50的定量分析。