[发明专利]一种小叶杨与胡杨杂交种再生苗的培育方法

权利要求书

1.一种小叶杨与胡杨杂交种再生苗的培育方法，其特征在于：包括以下步骤，

S1、建立外植体灭菌及无菌体系：于4～5月份，在室外生长的小与胡杨植株上剪取长20～30cm的当年生枝条，用软毛刷蘸取已加入清洗剂的自来水清洗外植体枝条表面的污渍及灰尘，之后用玻璃棒蘸取一滴吐温80对枝条进行深层清洗，清洗后将外植体枝条置于流水下冲洗4～6个小时，之后置于超净工作台上进行灭菌处理；

S2、不定芽诱导与增殖：

A)、将完成灭菌处理的外植体材料放置在经过高压灭菌处理并铺有双层滤纸的培养皿中，剪除前后两端切口，保留茎段与叶片部分，茎段剪至长0.5cm长的小段，叶片剪至0.5cm×0.5cm的小片，并将四周边缘部分剪除，之后平铺接种至不定芽诱导培养基表面，用镊子轻轻按压使叶片与茎段的切口部分分别与培养基充分接触，最后进行封口培养；

B)、培养条件：接种后首先在暗环境中培养3天，之后置于温度24±2℃、光照强度1500～2000lx、光照时间14h/d的环境中培养；

S3、生根培养：

A)、选取步骤S2培养30天～40天、生长健壮、高2～3cm的小与胡杨不定芽为试验材料，剪取不定芽接种于盛有生根培养基的瓶中进行封口培养试管苗；

B)、培养条件：培养室温度设置为25℃，先暗培养4天，4天后逐渐增强光照强度且光照时间为12h/d，培养40天～50天后光照强度控制在1800～2200lx且光照时间为12h/d；

S4、炼苗移栽：选择经过40天～50天生根培养、根系发达、生长健壮的试管苗，先将瓶盖打开1/2后注入100ml蒸馏水，室内自然光下放置3天后将瓶盖全部打开，添加50ml蒸馏水，继续置于室内自然光下放置2天，随后将瓶苗移至温室全部打开瓶盖后放置2天后，用清水清洗瓶苗根部的培养基，清洗干净后移栽至蛭石、锯末、泥炭土的混合基质中，移栽完成后放置在苗床上，苗床上部覆盖规格为50％～70％的双层遮荫网，避免阳光直射，每天傍晚进行喷灌浇水，保证营养钵内土壤湿度为60％～80％，试管苗移栽定植15天后，根据土壤干湿情况适当增减浇水量，温室条件下生长30天后即可进行露地移栽定植

步骤S2中的诱导培养基配方为改良WPM+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+KT0.1mg/L+活性炭3.0g/L+琼脂4.5g/L+蔗糖30g/L，诱导培养基Ph6.0。

2.根据权利要求1所述的小叶杨与胡杨杂交种再生苗的培育方法，其特征在于：步骤S1中灭菌处理具体操作步骤如下，首先采用75％的乙醇对外植体枝条灭菌10s～30s，之后用无菌水冲洗3～5次；第二步用浓度为0.1％的HgC1₂消毒3～5min，之后用无菌水冲洗5～7次，最后用经过高压灭菌的滤纸吸干外植体表面残留的水分后接种。

3.杂交种再生苗的培育方法，其特征在于：根据权利要求1所述的小叶杨与胡杨杂交种再生苗的培育方法，其特征在于：步骤S3中的生根培养基配方为1/2WPM+蛋白胨1g/L+IBA0.4mg/L+香蕉150g/L+活性炭3.0g/L琼脂4.5g/L+蔗糖30g/L。

4.根据权利要求1所述的小叶杨与胡杨杂交种再生苗的培育方法，其特征在于：步骤S4中蛭石、锯末、泥炭土三种基质的体积比例为2：1：1。