[发明专利]一种保健食品中不饱和脂肪酸含量测定的前处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及保健食品分析领域，特别涉及一种保健食品中不饱和脂肪酸含量测定的前处理方法。

背景技术

目前保健食品中α-亚麻酸的测定方法标准GB28404-2012前处理原理为试样经酸水解后用乙醚和石油醚这两种易挥发的有机溶剂去提取脂肪，提取的有机相经浓缩蒸干，用正己烷溶解脂肪，其中α-亚麻酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和二十二碳六烯酸(DHA)经氢氧化钠-甲醇溶液进行酯交换生成脂肪酸甲酯后，通过气相色谱分离检测，以保留时间定性，外标法定量。该方法采用的前处理方法具体为：在50mL比色管中对样品进行酸水解，水解完毕后加入乙醇混合，然后移入100mL具塞量筒中，分别加入无水乙醚和石油醚进行振摇，静置，分层，分离出有机层，过无水硫酸钠滤入浓缩瓶中。

在使用有机溶剂无水乙醚和石油醚进行提取过程中，有机相和水相由于振摇，原本不相容的两种液体混合在一起，发生“乳化”(乳化是一种液体以极微小液滴均匀地分散在互不相溶的另一种液体中的作用)现象。而国标GB28404-2012规定的上述方法经静置后，仍有大部分乳化现象，不能最大限度提取脂肪，使检测结果偏小。

具体地，GB28404-2012规定的前处理方法存在以下三个缺点：

其一：100ml具塞量筒不能离心，且市面上也没有应用于100ml具塞量筒的离心机。这样就导致不能最大限度提取脂肪，总有部分脂肪残留在乳化层中，导致结果偏低。虽然可以通过将100ml量筒中的样液转移到离心管中进行离心来消除乳化，但转移过程中会造成脂肪损失，且步骤繁琐。

其二，由于使用具塞量筒，振摇后上层有机相需要用吸管吸出，由于有机相液体表面张力小，吸出的有机相在吸取转移过程中会有滴落现象，这样操作就不得不让操作者在转移过程中变得小心翼翼，使前处理过程繁琐化。

其三，每次振摇需要振摇1分钟，检测人员手会很累。且振摇后需静止30min，实验发现静止30min后，提取的有机相依然有部分乳化，造成实验时间成本延长，不利于当今企业生产产品快速放行的需求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种保健食品中不饱和脂肪酸含量测定的前处理方法，使得该前处理方法能够最大限度地减少脂肪损失，显著提高α-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的含量，同时检测结果准确度高、稳定性好。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种保健食品中不饱和脂肪酸含量测定的前处理方法，包括如下步骤：

将待测样品粉碎后置于毛氏抽脂瓶中，加酸水解，有机溶剂搅拌提取，离心，倾倒、收集有机层，经浓缩得到浓缩液，蒸干，加正己烷溶解，得到前处理溶液。

本发明采用毛氏抽脂瓶替代国标GB28404-2012中规定的50ml比色管和100mL具塞量筒，可用于离心，经离心后水相有机相分层清晰，能够有效消除提取过程中由于振摇水相和有机相发生的“乳化”现象，最大限度地减少脂肪损失。抽脂瓶底部设计成球型，可使下层水相截留在球型里面，并且有鹰嘴流出口，倾斜即可倒出上层有机相，有效避免了下层水相一并倒出的问题。而且，整个提取过程都在同一个抽脂瓶中完成，无需转移，进一步减少待测组分的损失，最终显著提高了α-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的含量，且检测结果准确度高、稳定性好。另外，本发明前处理时间由8h缩短至4h以内，缩短了检测用时，并减少了操作误差。

作为优选，所述离心为采用毛氏离心机室温下600r/min，离心4～8min。更优选地，所述离心为采用毛氏抽脂瓶离心机室温下600r/min，离心5min。

作为优选，所述有机溶剂搅拌提取为向毛氏抽脂瓶中加入有机溶剂，于毛氏抽脂瓶摇混器中震荡频率为100次/min，振摇搅拌1min。所述有机溶剂优选为无水乙醚和石油醚，所述无水乙醚与所述石油醚的体积比优选为为1:1。

在本发明提供的具体实施例中，所述有机溶剂搅拌提取具体为：向毛氏抽脂瓶中加入25mL无水乙醚，密塞放置于毛氏抽脂瓶摇混器中100次/min振摇1min；再加入25mL石油醚，密塞放置于毛氏抽脂瓶摇混器中100次/min振摇1min。

作为优选，所述加酸水解为：向毛氏抽脂瓶中加水，将待测样品与水混匀，然后加入盐酸，置于70℃～80℃水浴中，采用涡旋混合器进行混合，间隔5min～10min混合一次，混合4～10次。

作为优选，所述加酸水解之后、所述有机溶剂搅拌提取之前还包括加乙醇混合的步骤。