[发明专利]一种少突胶质前体细胞的培养方法

说明书

本发明公开了一种少突胶质前体细胞的培养方法，包括如下步骤：S1.脐带血单个核细胞经MSCs培养基培养得到P1代脐带血MSCs；S2.P1代脐带血MSCs经神经球培养基培养收获P3代神经球细胞；S3.P3代神经球细胞经OPCs培养基培养得到OPCs。本发明的有益效果：本发明所述的少突胶质前体细胞的培养方法，采用产科废弃物‑‑新生儿胎盘、脐带中残留的血液来培养得到少突胶质前体细胞，代替传统的骨髓MSCs制备OPCs，为中枢神经系统损伤修复提找到了新的移植细胞资源。本发明所述的少突胶质前体细胞的培养方法，采用P1代脐带血MSCs诱导神经球形成，神经球形成率高达41%。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体来说，涉及一种少突胶质前体细胞的培养方法。

背景技术

少突胶质细胞（oligodendrocytes，OCs）的主要功能是在中枢神经系统中包绕轴突形成绝缘的髓鞘结构，维持和保护神经元的正常生理功能，OCs形成的髓鞘膜是最为特化和复杂的动物膜之一。

少突胶质前体细胞（oligodendrocyte precursor cells，OPCs）在中枢神经系统中分化产生少突胶质细胞形成髓鞘结构，是髓鞘损伤修复的内源细胞。OPCs细胞移植可提高脊髓损伤后动作电位的传递，恢复神经功能。

然而，成体OPCs的临床采集极其困难，寻找更合适的样本资源是OPCs临床研究和应用的瓶颈之一。胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）、诱导多能干细胞（inducedpluripotent stem cells，iPSCs）是具有跨胚层分化的多潜能干细胞，体外、体内均能分化成OPCs，理论上可以提供无限量的移植细胞资源。但生殖细胞采集的伦理学问题、分化潜能的非定向性以及诱导分化后胚性残留导致体内移植的致瘤性等成为这两类细胞作为OPCs种子细胞资源的障碍。成体干细胞，特别是间质基质细胞（Mesenchymal stroma cells，MSCs）是除造血干细胞之外研究最深入和广泛的细胞类型之一，其特征是来源广泛、易于分离培养、免疫原性低、体内移植没有致瘤性，是最适于生物工程和再生医学的种子细胞。有团队报道骨髓MSCs具有成OPCs分化潜能。但骨髓采集属于有创采集，对供者生理和心理损伤大，很难推广。

针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。

发明内容

针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种少突胶质前体细胞的培养方法，为中枢神经系统损伤修复提供新的移植细胞资源，找到新培养少突胶质前体细胞的方法。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种少突胶质前体细胞的培养方法，包括如下步骤：

S1.脐带血单个核细胞经MSCs培养基培养得到P1代脐带血MSCs；

S2.P1代脐带血MSCs经神经球培养基培养收获P3代神经球细胞；

S3. P3代神经球细胞经OPCs培养基培养得到OPCs。

进一步地，所述神经球培养基为包含以下物质的神经培养基：

0.5 mM L-谷氨酰胺；

2% B-27™ 添加剂；

20ng /mL重组人碱性成纤维细胞生长因子；

20ng /mL重组人表皮生长因子。

进一步地，所述OPCs培养基为包含以下物质的神经培养基：

0.5 mM L-谷氨酰胺；

2% B-27™ 添加剂；

1uM 1,25-二羟维生素D3；