[发明专利]MSCs来源的雪旺细胞的制备方法及试剂盒

权利要求书

1.一种MSCs来源的雪旺细胞制备试剂盒，其特征在于，包括SCs无血清基础培养基、SCs培养添加剂1、SCs培养添加剂2及SCs培养表面包被液，其中，

所述SCs无血清基础培养基为含有B27，无动物源成分血清替代品，人二氢睾丸酮，L-谷氨酰胺的DMEM/F12；

所述SCs培养添加剂1为含有重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人表皮生长因子、全反式维甲酸的DMEM/F12；

所述SCs培养添加剂2为含有重组人碱性成纤维细胞生长因子、毛喉素、重组人血小板来源生长因子AA、重组人神经胶质细胞生长因子-2的DMEM/F12；

所述SCs培养表面包被液为含有重组人层黏连蛋白、重组人纤黏连蛋白、重组人调蛋白-β1的DMEM/F12。

2.根据权利要求1所述的一种MSCs来源的雪旺细胞制备试剂盒，其特征在于，

所述SCs无血清基础培养基为含有1×B27，10%无动物源成分血清替代品，5nM人二氢睾丸酮，2mM L-谷氨酰胺的DMEM/F12；

所述SCs培养添加剂1为含有1 ug /mL重组人碱性成纤维细胞生长因子、1 ug /mL重组人表皮生长因子、2ug/ml 全反式维甲酸的DMEM/F12；

所述SCs培养添加剂2为含有0.5 ug/mL 重组人碱性成纤维细胞生长因子、0.5mM毛喉素、250 ng/mL重组人血小板来源生长因子AA、2.5ug/mL重组人神经胶质细胞生长因子-2的DMEM/F12；

所述SCs培养表面包被液为含有100ng/mL重组人层黏连蛋白、100ng/mL重组人纤黏连蛋白、1ug/mL 重组人调蛋白-β1的DMEM/F12。

3.一种MSCs来源的雪旺细胞制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.用SCs培养表面包被液包被培养表面；

S2.P2代的MSCs以MSCs培养基培养至60-70%汇合；

S3.换含SCs培养添加剂1的SCs无血清基础培养基，培养至80-90%汇合，用胰蛋白酶溶液消化收获细胞，记为神经上皮预诱导细胞；

S4.以含SCs培养添加剂2的SCs无血清基础培养基重悬神经上皮预诱导细胞，接种至被SCs培养表面包被液包被的培养表面，培养至60-80%汇合时传代，记为P0代SCs；

其中，

所述SCs无血清基础培养基为含有B27，无动物源成分血清替代品，人二氢睾丸酮，L-谷氨酰胺的DMEM/F12；

所述SCs培养添加剂1为含有重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人表皮生长因子、全反式维甲酸的DMEM/F12；

所述SCs培养添加剂2为含有重组人碱性成纤维细胞生长因子、毛喉素、重组人血小板来源生长因子AA、重组人神经胶质细胞生长因子-2的DMEM/F12；

所述SCs培养表面包被液为含有重组人层黏连蛋白、重组人纤黏连蛋白、重组人调蛋白-β1的DMEM/F12。

4.根据权利要求3所述的一种MSCs来源的雪旺细胞制备方法，其特征在于，

所述含SCs培养添加剂1的SCs无血清基础培养基中SCs培养添加剂1含量为2%；

所述含SCs培养添加剂2的SCs无血清基础培养基中SCs培养添加剂2的含量为2%。

5.根据权利要求3所述的一种MSCs来源的雪旺细胞制备方法，其特征在于，所述步骤S4后还包括如下步骤：将P0代SCs按常规贴壁细胞传代方法传代，收获P1代细胞。

6.根据权利要求5所述的一种MSCs来源的雪旺细胞制备方法，其特征在于，所述常规贴壁细胞传代方法传代过程中的接种密度为2×10⁴/cm²，培养体系为含2%SCs培养添加剂2的SCs无血清基础培养基；培养表面为经SCs培养表面包被液包被的培养表面。

7.根据权利要求3所述的一种MSCs来源的雪旺细胞制备方法，其特征在于，所述MSCs来源于人脐带、羊膜、羊水、胎盘、脐带血、宫膜、牙髓、骨髓、皮肤、骨骼肌组织。