[发明专利]MSCs来源的雪旺细胞的制备方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种MSCs来源的雪旺细胞制备试剂盒，包括SCs无血清基础培养基、SCs培养添加剂1、SCs培养添加剂2及SCs培养表面包被液，其中，SCs无血清基础培养基为含有B27，无动物源成分血清替代品，人二氢睾丸酮，L‑谷氨酰胺的DMEM/F12；SCs培养添加剂1为含有重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人表皮生长因子、全反式维甲酸的DMEM/F12；SCs培养添加剂2为含有重组人碱性成纤维细胞生长因子、毛喉素、重组人血小板来源生长因子AA、重组人神经胶质细胞生长因子‑2的DMEM/F12；SCs培养表面包被液为含有重组人层黏连蛋白、重组人纤黏连蛋白、重组人调蛋白‑β1的DMEM/F12。本发明提出的雪旺细胞制备试剂盒，具有操作简单、无动物源成分的优势，获得的SCs均一性好、产率高。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体来说，涉及一种MSCs来源的雪旺细胞的制备方法及试剂盒。

背景技术

神经细胞在生理学方面属于不可再生细胞，当神经损伤发生时，常规的治疗手段是周围神经移植来进行修复。自体神经移植一方面会带来新的神经损伤，另一方面，由于神经再生不全、远端接合口纤维化、疤痕化和神经瘤发生等影响神经功能恢复。近些年的研究发现，周围神经系统的组织学微环境是神经再生修复的关键因素，而雪旺细胞（Schwanncells ，SCs）是微环境的重要组成部分。诸多研究表明，SCs与周围细胞外基质成分相互作用稳定髓磷脂的生理状态，在神经再生过程中诱导髓鞘形成，并分泌多种神经营养和嗜神经因子促进轴突再生，SCs移植在脱髓鞘、神经退行性、外伤性神经损伤等疾病的细胞治疗领域的应用受到广泛关注。

既往SCs多分离自自体神经周围组织，其取材受限，提取复杂，细胞收率低，限制了雪旺细胞的临床研究和产品化。近年来的研究发现，多种来源的间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）具有SCs分化潜能。目前，多个实验室披露的诱导SCs分化的方法需要β-巯基乙醇、全反式维甲酸两次预诱导，然后使用SCs诱导培养基，不经过Nestin+神经前体细胞阶段，不符合雪旺细胞发育规律，且步骤繁琐，使用胎牛血清，得到的SCs均一性差、产率低。因此，研究如何从MSCs制备，按SCs发育程序诱导，能够用于临床的、组织工程产品的纯度高、数量大的雪旺细胞是关键环节。

针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。

发明内容

针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种MSCs来源的雪旺细胞制备方法及试剂盒，具有操作简单、无动物源成分的优势，获得的SCs均一性好、产率高的特点。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种MSCs来源的雪旺细胞制备试剂盒，包括SCs无血清基础培养基、SCs培养添加剂1、SCs培养添加剂2及SCs培养表面包被液，其中，

所述SCs无血清基础培养基为含有B27，无动物源成分血清替代品，人二氢睾丸酮，L-谷氨酰胺的DMEM/F12；

所述SCs培养添加剂1为含有重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人表皮生长因子、全反式维甲酸的DMEM/F12；

所述SCs培养添加剂2为含有重组人碱性成纤维细胞生长因子、毛喉素、重组人血小板来源生长因子AA、重组人神经胶质细胞生长因子-2的DMEM/F12；

所述SCs培养表面包被液为含有重组人层黏连蛋白、重组人纤黏连蛋白、重组人调蛋白-β1的DMEM/F12。

进一步地，

所述SCs无血清基础培养基为含有1×B27，10%无动物源成分血清替代品，5nM人二氢睾丸酮，2mM L-谷氨酰胺的DMEM/F12；