[发明专利]一种石蜡切片的制备方法

权利要求书

1.一种用于制备绦柳花芽、红叶石楠叶片、红叶石楠幼嫩茎段、狗尾草叶片、狗尾草茎秆以及狗尾草根尖石蜡切片的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)固定：用FAA固定液对材料进行固定，固定时间在24h以上，所述FAA固定液由90mL70％的乙醇、5mL冰醋酸、5mL38％的甲醛、5mL甘油混合配成；

(2)脱水透明：材料先经过70％乙醇和80％乙醇在温度23～28℃，绝对压力0.02MPa的条件下分别处理0.5～1.5h；

再经过不同浓度梯度的蒸馏水、95％乙醇和叔丁醇混合溶液，在温度29～31℃，绝对压力0.02～0.03MPa的条件下进行处理，每次处理时间为0.5～1.5h；所述不同浓度梯度的蒸馏水、95％乙醇和叔丁醇混合溶液，蒸馏水、95％乙醇溶液以及叔丁醇的体积比分别为15：50：35，5：40：55，0：25：75，0：0：100；其中，体积比0：0：100混合液需处理2次；经过以上操作，渐次脱去组织中的水分并透明；

(3)浸蜡：将透明后的材料放置在不同浓度比例的叔丁醇和石蜡碎屑混合溶液中，在温度低于石蜡熔点的最低温度0～3℃，绝对压力0.02～0.03MPa的条件下进行处理，每次处理的时间为1～2h；所述不同浓度比例的叔丁醇和石蜡碎屑混合溶液中，叔丁醇和石蜡碎屑的体积质量比分别为(4～7)mL:1g和(6～9)mL:3g；之后在温度高于石蜡熔点的最高温度0～10℃，绝对压力0.03MPa的条件下进行处理，每间隔1h换一次纯蜡，共换2次；

然后依次进行包埋、切片、展片、贴片、烤片、染色脱蜡和封片；

所述染色脱蜡具体为：将切片依次经1％番红水溶液染色和0.5％固绿溶液进行染色后，再进行脱蜡处理。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述染色脱蜡的具体操作为，切片放入1％番红水溶液染色15min→70％酒精1min→0.5％固绿溶液染色3min→100％酒精10s→超安环保透明剂脱蜡20min→超安环保透明剂脱蜡20min→超安环保透明剂脱蜡20min。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)固定：用FAA固定液对材料进行固定，固定时间在24h以上；

(2)脱水透明：将所述材料先经过70％乙醇和80％乙醇在温度24℃，绝对压力0.02MPa的条件下分别处理1h；

再经过不同浓度梯度的蒸馏水、95％乙醇和叔丁醇混合溶液，在温度30℃，绝对压力0.02～0.03MPa的条件下进行处理，每次处理时间为1h；所述不同浓度梯度的蒸馏水、95％乙醇和叔丁醇混合溶液，按体积比，蒸馏水、95％乙醇溶液以及叔丁醇的体积比分别为15：50：35，5：40：55，0：25：75和0：0：100；其中，体积比0：0：100混合液需处理2次；经过以上操作，渐次脱去组织中的水分并透明；

(3)浸蜡：将透明后的材料放置在不同浓度比例的叔丁醇和石蜡碎屑混合溶液中，在温度低于石蜡熔点的最低温度0～3℃，绝对压力0.03MPa的条件下进行处理，每次处理的时间为1h；所述不同浓度比例的叔丁醇和石蜡碎屑混合溶液中，叔丁醇和石蜡碎屑的体积质量比分别为6mL:1g和8mL:3g；之后在温度高于石蜡熔点的最高温度0～10℃，绝对压力0.03MPa的条件下，每间隔1h换一次纯蜡，共换2次，完成浸蜡；

(4)包埋；

(5)切片，切片至厚度为8～12um；

(6)展片和贴片

(7)烤片，将切好的切片粘在粘附性载玻片上，置于38～40℃烘箱中过夜；

(8)染色脱蜡：切片放入1％番红水溶液染色15min→70％酒精1min→0.5％固绿溶液染色3min→100％酒精10s→超安环保透明剂脱蜡20min→超安环保透明剂脱蜡20min→超安环保透明剂脱蜡20min；

(9)封片。