[发明专利]一种石蜡切片的制备方法

说明书

本发明涉及一种石蜡切片的制备方法，在制备切片的过程中，提供了一处高效环保的脱水透明剂和脱蜡剂，本发明所述的脱水透明剂与现有常用的二甲苯相比，更为安全环保，还可简化实验步骤，将脱水和透明在一步操作中完成。为进一步的提高操作的效率，针对于本申请的脱水透明剂和脱蜡剂，对脱水透明和染色脱蜡的操作条件进行了优化，严格控制各步骤的温度，并控制反应在负压的条件下进行，进而优化了染色脱蜡操作的步骤。通过上述操作，可大大缩短实验时间，且最终得到十分清晰的组织结构图。

技术领域

本发明涉及石蜡切片技术领域，具体涉及一种脱水透明剂。

背景技术

石蜡切片(paraffin section)组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。

现有技术中的石蜡切片制备方法复杂，包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片、贴片、烤片、脱蜡至水、染色、脱水、透明、封片等多个步骤。而且在制备的过程中需要使用多种试剂，尤其是在透明的过程中通过使用二甲苯作为透明液，这种试剂具有较高的毒性。而且在制备的过程中由于步骤复杂，通常耗时较长。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效地制备石蜡切片的方法，其为通过有效地减少脱水透明和染色的时间，可明显地缩短石蜡切片的制备周期。具体的，包括如下步骤：材料的固定、脱水透明、浸蜡、包埋、切片、贴片、染色脱蜡和封片；脱水透明中所用的脱水透明剂包括：

a：不同浓度梯度的乙醇溶液；

b：不同浓度梯度的蒸馏水、95％乙醇溶液以及叔丁醇的混合液；

所述不同浓度梯度的乙醇溶液中，最小浓度的乙醇溶液与固定液操作中所使用的固定液中乙醇溶液的浓度相同；最大浓度的乙醇溶液的浓度为80～90％；

所述不同浓度梯度蒸馏水、95％乙醇溶液以及叔丁醇的混合液，按体积比，蒸馏水、95％乙醇溶液以及叔丁醇的体积比分别为15：50：35；5：40：55；0：25：75；和0：0：100；

所述浸蜡过程中所使用的试剂为不同浓度梯度的叔丁醇和石蜡的混合液以及纯石蜡，按体积重量比，所述不同浓度梯度的叔丁醇和石蜡的混合液的体积质量比为(4～7)mL:1g和(6～9)mL:3g。

现有技术中脱水和透明通常分两步进行，用酒精溶液完全将固定后的材料中的水分去替换，再用二甲苯、苯、氯仿或丙酮等透明剂进行透明处理，操作步骤复杂，且现用的透明剂多为有毒、有害试剂。本发明所述的试剂由乙醇和叔丁醇溶剂混合而成，毒性相对较小，安全环保，而且用这种试剂在进行脱水和透明的过程中可一步完成，不需要先将水分完全去除再进行透明处理，简化了操作步骤。而且与脱水透明剂相适应的，本申请对浸蜡试剂也进行了相应的调整，与现有技术相比，使用这种浸蜡试剂可缩短处理时间。

优选的，所述脱水透明的具体操作为，按浓度从小到大的顺序，用不同浓度梯度的酒精依次对材料进行处理，然后再按叔丁醇浓度从小到大的顺序，用不同浓度梯度的蒸馏水、95％乙醇溶液以及叔丁醇的混合液对材料进行处理。

优选的，所述浸蜡的具体操作为按石蜡用量从小到大的顺序，用不同浓度梯度的叔丁醇和石蜡的混合液对材料进行处理，最后用所述纯石蜡对材料进行处理。

优选的，在用不同浓度梯度的酒精溶液对材料进行处理的过程中，控制温度为23～28℃，绝对压力0.01～0.03MPa，同一浓度的酒精溶液对材料的处理时间为0.5～2h；在用不同浓度的梯度蒸馏水、95％乙醇溶液以及叔丁醇的混合液对材料进行处理的过程中，控制温度为28～32℃，绝对压力0.02～0.04MPa，同一浓度的混合液对材料的处理时间为0.5～2h。