[发明专利]一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒内包括10.0μL的2.5×PCR缓冲液、引物混合物、热启动Taq酶5U/μ以及PCR水，2.5×PCR缓冲液包括5.0mM MgCl2、0.5mM each dNTP、125mM Tris-HCl、125mM KCl和1.5mg/mLBSA。

2.根据权利要求1所述的一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测试剂盒，其特征在于：所述引物混合物包括一条带有荧光标记的上游引物ZF-F:5′-TTGGTAAGGTGTTCAGGATGGTT-3′,两条下游引物ZFY-R：该两条引物分别为5′-GGGAGAGTACTTGTAAATGTGTTCAG-3′和5′-GTTAAGCAGCAAGTAGCCTAACATAG-3′，其中上游引物的5′所带的荧光染料为FAM。

3.一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：待检测样本DNA的提取，DNA提取采用Chelex-100法；

步骤二：在PCR反应管配置反应体系并混匀；

步骤三：将PCR反应管放入PCR扩增仪中进行扩增，PCR扩增程序为：98℃1min；98℃20s、60℃75s、72℃30s，30个循环；72℃终延伸5min；4-16℃保持；

步骤四：PCR产物的检测，由去离子甲酰胺与系统中分子量内标(Orange-500)组成上样混合物[(0.5μL分子量内标+10μL去离子甲酰胺)×(样品数)]，将9μL上样混合物与1μL扩增产物混合，简短离心将液体收集到离心管管子底部，样品95℃变性3分钟，然后置于冰上冷却3分钟，使DNA完全变性，将样品放入基因分析仪的样品托盘中，用ABI3100遗传分析仪进行电泳和检测；

步骤五：分型分析，用片段分析软件GeneMapper分析遗传分析仪检测收集的数据，检测为单峰时，表明样本来源为母牛，双峰时为公牛。