[发明专利]一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测试剂盒，包括牛基因组DNA、2.5×PCR缓冲液、引物混合物和PCR水(ddH2O)。本发明还公开了一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测方法，包括样本DNA的提取；在PCR反应管中添加试剂；放入PCR扩增仪中进行扩增；PCR产物的检测；分型分析。本发明通过PCR扩增反应，产生带有荧光标记的产物片段，并通过ABI3100遗传分析仪进行电泳和检测，检测结果为单峰时，表明样本来源为母牛，结果为双峰时，则为公牛，本发明中建立了牛肉及其制品的性别来源鉴定方法，具有检测快速、精准、特异性强、灵敏度高、操作简便的特点。

技术领域

本发明涉及动物源成分的性别鉴定技术领域，具体为一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

牛肉是一种营养价值较高的保健型食品，具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇的特点，并且含有人体所需的一切必需氨基酸。而随着生活水平的不断提高，牛肉消费群体的增大，人们对肉类的品质提出了更高的要求，牛肉品质追求更高的营养价值、观赏价值、赏味价值甚至是功能性食品价值。

牛肉的品质与性别密切相关，不同性别对牛肉品质的影响主要表现在大理石花纹、嫩度和风味上。一般来说，公牛肉的嫩度较阉牛和母牛的差，母牛肉较阉牛肉差，阉牛中公阉牛肉的嫩度也比母阉牛和母牛的差，但也有公牛肉嫩度较好的报道。在肉的色泽和感官特征方面，阉牛和小母牛也要好于公牛。在酮体品质和肉品质方面，公牛肉一般酮体较长，肩、背、腰部脂肪厚度小，脂肪率低，瘦肉多，腿部、肩部等优质切块的比例较高，屠宰率却较低，而母牛肉则相反。此外，调查表明，牛肉的味道也促进牛肉消费的重要因素，而性别对于风味有着显著的影响，其主要是通过性激素的产生、代谢的遗传控制以及性激素对脂肪组成和代谢的影响来发挥作用，其中，雄性激素会增加蛋白质的沉积，减少脂肪合成，进而使肌肉的芳香特性大为降低，并产生特殊的膻味。

我国牛肉产量位居世界第三，但出口量很小，近年来我国牛肉进出口贸易波动较大，但总的来看出口大于进口，一直是牛肉的净出口国，而在国际贸易中需要对牛肉的性别进行鉴定，为此我们提出一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测试剂盒及其检测方法用于解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测试剂盒及其检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测试剂盒，该试剂盒包括2.5×PCR缓冲液、引物混合物、热启动Taq酶5U/μ以及PCR水，所述反应混合物含2.5×PCR缓冲液包括5.0mM MgCl2、0.5mM eachdNTP、125mM Tris-HCl、125mM KCl 和1.5mg/mL BSA。

优选的，所述引物混合物包括一条带有荧光标记的上游引物ZF-F：5′ -TTGGTAAGGTGTTCAGGATGGTT-3′，两条下游引物ZFY-R：该两条引物分别为5′-GGGAGAGTACTTGTAAATGTGTTCAG-3′和5′ -GTTAAGCAGCAAGTAGCCTA ACATAG-3′，其中上游引物的5′所带的荧光染料为FAM。

一种可以鉴别牛肉及其制品的性别来源的荧光标记扩增检测方法，包括以下步骤：

步骤一：待检测样本DNA的提取，DNA提取采用Chelex-100法；

步骤二：在PCR反应管中按下表进行加样：

步骤三：将PCR反应管放入PCR扩增仪中进行扩增，PCR扩增程序为： 98℃1min；98℃20s、60℃75s、72℃30s，30个循环；72℃终延伸5min；4-16 ℃保持；