[发明专利]大肠癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及大肠癌检测试剂盒

权利要求书

1.与生物标志物特异性结合的检测物在制备大肠癌检测试剂或大肠癌检测试剂盒中的应用；

所述生物标志物包括hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p；

所述生物标志物来源自人血浆；

所述与生物标志物特异性结合的检测物包括：

碱基序列如SEQ ID No.1所示的第一正向引物、碱基序列如SEQ ID No.2所示的第二正向引物、碱基序列如SEQ ID No.3所示的第三正向引物，以及碱基序列如SEQ ID No.4所示的通用反向扩增引物。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括RNA提取试剂、加A尾试剂和RNA逆转录试剂；

所述RNA提取试剂用于提取待测样品中的RNA；

所述加A尾试剂用于在提取的所述RNA的一端加A碱基；

所述RNA逆转录试剂用于将加A尾后的所述RNA逆转录成cDNA。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述RNA逆转录试剂包括RNA逆转录引物，所述RNA逆转录引物为通用RNA逆转录引物，所述通用RNA逆转录引物的碱基序列如SEQ IDNo.5所示。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括能够检测内参基因的试剂，所述内参基因选自U6、GAPDH及β-actin中的至少一种。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述能够检测内参基因的试剂包括内参基因RNA逆转录引物、内参基因PCR扩增正向引物和内参基因PCR扩增反向引物，其中，所述内参基因PCR扩增正向引物针对所述内参基因逆转录后得到的cDNA设计。

6.一种大肠癌检测试剂盒，其特征在于，包括碱基序列如SEQ ID No.1所示的第一正向引物、碱基序列如SEQ ID No.2所示的第二正向引物、碱基序列如SEQ ID No.3所示的第三正向引物，以及碱基序列如SEQ ID No.4所示的通用反向扩增引物。

7.根据权利要求6所述的大肠癌检测试剂盒，其特征在于，还包括RNA提取试剂、加A尾试剂和RNA逆转录试剂；

所述RNA提取试剂用于提取待测样品中的RNA；

所述加A尾试剂用于在提取的所述RNA的一端加A碱基；

所述RNA逆转录试剂用于将加A尾后的所述RNA逆转录成cDNA。

8.根据权利要求7所述的大肠癌检测试剂盒，其特征在于，所述RNA逆转录试剂包括RNA逆转录引物，所述RNA逆转录引物为通用RNA逆转录引物，所述通用RNA逆转录引物的碱基序列如SEQ ID No.5所示。

9.根据权利要求2所述的大肠癌检测试剂盒，其特征在于，还包括能够检测内参基因的试剂，所述内参基因选自U6、GAPDH及β-actin中的至少一种。

10.根据权利要求9所述的大肠癌检测试剂盒，其特征在于，所述能够检测内参基因的试剂包括内参基因RNA逆转录引物、内参基因PCR扩增正向引物和内参基因PCR扩增反向引物，其中，所述内参基因PCR扩增正向引物针对所述内参基因逆转录后得到的cDNA设计。