[发明专利]一种茄子遗传转化方法

权利要求书

1.一种茄子遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将茄子种子前处理后置于发芽培养基中进行发芽培养，得到无菌茄子幼苗；

S2、对幼苗进行处理获得外植体，取外植体接种于预培养基中进行预培养；

S3、活化含目的基因的农杆菌，配置含所述农杆菌的侵染菌液；

S4、将预培养所得外植体用所述侵染菌液侵染后，在共培养基中进行共培养；

S5、将共培养所得外植体经清洗、浸泡后，置于第一恢复培养基中进行第一恢复培养，再置于筛选培养基中进行筛选培养；将筛选所得外植体置于第二恢复培养基进行第二恢复培养；

其中，步骤S5中，所述第一恢复培养基包括MS、30 g·L^-1蔗糖、2.0 mg·L^-1玉米素、300mg·L^-1羧苄青霉素和7 g·L^-1琼脂粉，pH值为5.8；

所述第一恢复培养的条件为：光照强度为3000 lux，温度为23～27℃，光16 h暗8 h交替培养7 d；

所述筛选培养基包括MS、30 g·L^-1蔗糖、2.0 mg·L^-1玉米素、300 mg·L^-1羧苄青霉素、10～100 mg·L^-1筛选剂和 7 g·L^-1琼脂粉，pH值为5.8；

所述筛选培养的条件为：光照强度为3000 lux，温度为23～27℃，光16 h暗8 h交替培养56 d；

所述第二恢复培养基包括MS、30 g·L^-1蔗糖、2.0 mg·L^-1 6-苄氨基腺嘌呤、1 mg·L^-1玉米素、300 mg·L^-1羧苄青霉素和7 g·L^-1琼脂粉，pH值为5.8；

所述第二恢复培养的条件为：光照强度为3000 lux，温度为23～27℃，光16 h暗8 h交替培养14～42 d；

S6、取第二恢复培养所得不定芽进行生根培养，将再生植株进行驯化移栽；

其中，所述生根培养基包括MS、30 g·L^-1蔗糖、0.1 mg·L^-1吲哚乙酸、200 mg L^-1羧苄青霉素和7g·L^-1琼脂粉，pH值为5.8；

所述生根培养的条件为：光照强度为3000 lux，温度为23～27℃，光16 h暗8 h培养14～28 d。

2.根据权利要求1所述的茄子遗传转化方法，其特征在于，步骤S1中，所述发芽培养基包括MS、30 g·L^-1蔗糖和7 g·L^-1琼脂粉，pH值为5.8；

所述发芽培养的条件为：光照强度为3000 lux，温度为23～27℃，先暗培养6～8 d，待种子露白后，光16 h暗8 h交替培养6～8 d。

3.根据权利要求1所述的茄子遗传转化方法，其特征在于，步骤S2中，所述预培养基包括MS、30 g·L^-1蔗糖、2.0 mg·L^-1玉米素和7 g·L^-1琼脂粉，pH值为5.8；

所述预培养的条件为：光照强度为3000 lux，温度为23～27℃，光16 h暗8 h交替培养2d。

4.根据权利要求1所述的茄子遗传转化方法，其特征在于，步骤S3中，所述活化的步骤包括：将含目的基因的农杆菌进行震荡培养，温度为28 ℃，转速为220 r·min^-1，得到OD_600nm值为0.6～0.7的农杆菌菌液；

所述配置的步骤包括：分别取等体积的农杆菌菌液和培养液，将所述农杆菌菌液离心，弃上清液后，加入所述培养液重悬得侵染菌液；所述培养液包括MS、30g·L^-1蔗糖、2.0 mg·L^-1玉米素、100 mmol·L^-1乙酰丁香酮，pH值为5.8。