[发明专利]一种茄子遗传转化方法

说明书

本发明提供了一种茄子遗传转化方法，包括如下步骤：S1、将茄子种子前处理后置于发芽培养基中进行发芽培养，得无菌茄子幼苗；S2、对幼苗进行处理获得外植体，取外植体接种于预培养基中进行预培养；S3、活化含目的基因的农杆菌，配置含所述农杆菌的侵染菌液；S4、将预培养所得外植体用所述侵染菌液侵染后，在共培养基中进行共培养；S5、将共培养所得外植体经清洗、浸泡后，置于第一恢复培养基中进行第一恢复培养，再置于筛选培养基中进行筛选培养；将筛选所得外植体置于第二恢复培养基进行第二恢复培养；S6、取第二恢复培养所得不定芽进行生根培养，将再生植株进行驯化移栽。本方法具有转化周期短、植株假阳性比率低和转化率高的优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种茄子遗传转化方法。

背景技术

茄子(Solanum melongena L.)原产亚热带地区，亚洲栽培最多，是我国重要的经济作物。2016年我国茄子种植面积1209万亩，产量3173万吨，并呈逐年递增趋势。茄子营养丰富，含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素以及钙、磷、铁等多种营养成分，具有抗衰老、降血压、降胆固醇等营养和药用价值。

生产过程中，绵疫病、灰霉病、蚜虫、红蜘蛛、冷害等的发生会造成茄子田间产量大幅度下降。虽然通过田间轮作、种子和苗床消毒、嫁接育苗等方法能减少病虫害的发生，但是此类难题依然没有得到很好的解决。植物转基因技术是21世纪新兴的生物技术，通过将外源基因转入植物体内，可改善或增强植物的遗传特性。常用的转化方法有原生质体融合、花粉管通道法、基因枪法、农杆菌介导法等。农杆菌介导法可行性强，具有操作简单，成本低，重复性好等特点。

茄子转基因技术研究相比同科的番茄、马铃薯进展较为缓慢，缺少高效稳定的遗传转化体系。转基因技术为提高茄子的产品品质，培育抗病毒、抗虫、抗盐碱特性的作物新品种提供了可行性依据，因此建立一套茄子高效遗传转化体系具有重要意义。但目前，利用农杆菌介导法制备转基因茄子的方法中还存在试用茄子品种范围窄、转化周期过长、获得植株假阳性比率高(11.2％～63.6％)、转化率低(1.9％)的不足。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种茄子遗传转化方法；进一步地，本发明提供一种稳定高效的茄子遗传转化体系。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明提供一种茄子遗传转化方法，包括如下步骤：

S1、将茄子种子前处理后置于发芽培养基中进行发芽培养，得到无菌茄子幼苗；

S2、对幼苗进行处理获得外植体，取外植体接种于预培养基中进行预培养；

S3、活化含目的基因的农杆菌，配置含所述农杆菌的侵染菌液；

S4、将预培养所得外植体用所述侵染菌液侵染后，在共培养基中进行共培养；

S5、将共培养所得外植体经清洗、浸泡后，置于第一恢复培养基中进行第一恢复培养，再置于筛选培养基中进行筛选培养；将筛选所得外植体置于第二恢复培养基进行第二恢复培养；

S6、取第二恢复培养所得不定芽进行生根培养，将再生植株进行驯化移栽。上述步骤中，在培养基中的培养均在无菌条件下进行。

上述第一恢复培养可使共培养后的外植体恢复活力，诱导愈伤组织；通过筛选培养筛选后的外植体可确定其具有标记基因抗性，因此在后续的培养中可不使用筛选剂，即第二恢复培养，同时促进外植体不定芽的生长。

优选地，步骤S1中，所述前处理的步骤包括：

S1.1取子粒饱满茄子种子用浓度为600mg·L^-1的赤霉素浸泡2h；

S1.2在无菌条件下，将上述茄子种子用无菌水清洗1遍，75％乙醇清洗1遍，无菌水清洗1遍，20％次氯酸钠浸泡30min，无菌水清洗4遍；