[发明专利]一种将miRNA从石墨烯上解吸附的方法

说明书

本发明涉及分析化学和生物检测技术领域，公开了一种将miRNA从石墨烯上解吸附的方法。本发明所述方法将吸附有miRNA的石墨烯直接进行原位反转录，将miRNA解吸附下来。本发明本采用原位反转录的方式，即直接对吸附有miRNA的石墨烯材料进行逆转录，其解吸效率显著高于现有技术中方案，且产物对后续反应没有抑制效果，可直接用于后续的PCR。

技术领域

本发明涉及分析化学和生物检测技术领域，具体涉及一种将miRNA从石墨烯上解吸附的方法。

背景技术

MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，主要参与转录后基因表达的调控，其能够和目的mRNA的结合使目的基因沉默或者降低表达，从而起到调控机体的作用。miRNA的检测是众多核酸检测领域中重要的一个环节，因为其含量的变化往往和癌症的发生有着密切的关系。

目前，根据相关文献报道，氧化石墨烯(GO)或还原氧化石墨烯(rGO)由于富含π电子云，能够过π-π相互作用使短单链核酸吸附在石墨烯表面，并且rGO或GO能够猝灭靠近其的荧光基团。

有研究报道提出(Xiaoli Zhu et al.,Chem.Commun.,2015,51,10002-10005.)利用滚还扩增(RCA)完成了对吸附在石墨烯表面的miRNA的检测。但是为了使得miRNA的检测更加具有普适性，即使用PCR来检测miRNA，其吸附在石墨烯表面后的解吸附是十分必要的。根据文献报道，cDNA，随机DNA，BSA，碱，尿素或者异丙醇的加入，以及在加热条件下可以使吸附在石墨烯表面的单链核酸适当解吸附(Chang Lu et al.,Langmuir,2016,32,10776-10783)，但是这些方法存在解吸效率低，不兼容后续PCR等缺点，例如，BSA和cDNA对吸附在石墨烯表面的单链核酸的解吸效率只有25％左右，碱，尿素和异丙醇的加入会抑制后续的反转录和PCR。可见寻找一种高效和具备下游兼容性的解吸方法对miRNA的检测至关重要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种将miRNA从石墨烯上解吸附的方法，使得所述方法具备较高的解吸附效率，且产物对后续反应没有抑制效果，可直接用于后续的PCR。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种将miRNA从石墨烯上解吸附的方法，将吸附有miRNA的石墨烯直接进行原位反转录，将miRNA解吸附下来。

针对现有对吸附在石墨烯表面的单链核酸解吸附的方法效率不高以及影响后续反转录和PCR的缺陷，本发明直接进行原位反转录进行解吸附，将解吸附和反转录合为一步，不仅提高了miRNA的解吸附效率，并且不影响后续PCR扩增的环节。

作为优选，本发明所述原位反转录的体系为：

8-16μL原位反转录buffer、1-5μL反转录酶、余量水，共20μL。

在本发明具体实施方式中，所述原位反转录buffer可以是8μL、10μL、12μL或16μL，所述反转录酶可以是1μL、2μL、3μL、4μL或5μL。更为具体的，所述原位反转录的体系为：10μL原位反转录buffer、2μL反转录酶、8μL水，共20μL。所述原位反转录体系可通过市售途径获得，例如天根生化科技(北京)有限公司，名称为miRcute Plus miRNA Fisrt-Strand cDNASynthesis Kit.。其中，所述反转录酶为两种酶组分，一种为E.coli Poly(A)polymerase,另一种为RTase，首先miRNA在E.coli Poly(A)polymerase的作用下进行3’端加多聚A尾，再在Oligo(dT)通用逆转录引物和RTase的作用下进行逆转录反应。

作为优选，所述原位反转录在42℃下进行1小时。