[发明专利]一种利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F1

权利要求书

1.一种利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F₁杂种的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：种间杂交F₁杂种及其亲本的DNA提取；

步骤二：建立SSR反应体系及扩增反应程序：利用SSR标记引物emg01J09和emh21J12进行杂种鉴定，所述杂种为：迷你茄×赤茄、苏州牛角×赤茄、西安绿茄×旋花茄、迷你茄×红茄、迷你茄×旋花茄或苏州牛角×旋花茄的F₁杂交后代，引物emg01J09-F具有SEQID NO.1的核苷酸序列；引物emg01J09-R具有SEQID NO.2的核苷酸序列；引物emh21J12-F具有SEQIDNO.3的核苷酸序列；引物emh21J12-R具有SEQID NO.4的核苷酸序列；

步骤三：聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；

步骤四：杂交种真实性的鉴定；在杂交后代的扩增产物中，是否具有父母本互补型或父本型条带，若有则为真杂交种，反之，则为假杂交种。

2.如权利要求1所述的利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F₁杂种的方法，其特征在于，步骤一中，以亲本和杂交种植株的叶片为材料，提取DNA；提取的DNA用1%的琼脂糖凝胶电泳进行纯度的检测。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述DNA样品置于-20℃保存。

4.如权利要求1所述的利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F₁杂种的方法，其特征在于，步骤二中，所述SSR反应体系：6.7µl ddH₂O，1.0µl 10×Buffer，0.2µl dNTPs，1.0µl 引物，0.1µl rTaq聚合酶、1.0µl DNA模板。

5.如权利要求1所述的利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F₁杂种的方法，其特征在于，步骤二中，扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性5min，55~60℃退火30s，72℃延伸45s，进行35个循环；最后72℃充分延伸10min，4℃保存。

6.如权利要求1所述的利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F₁杂种的方法，其特征在于，步骤三中，电泳检测具体步骤为：扩增产物在6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，每个样品取1.4µl和0.7µl Loading Buffer混合点样，以DL500 DNA Maker为对照，在180V恒压下，电泳1.5h，随后进行银染观察。

7.如权利要求6所述的利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F₁杂种的方法，其特征在于，银染具体步骤如下：

(1) 用自来水将电泳槽和四块玻璃板冲洗干净，放在操作台上自然蒸干；

(2) 按照长板外短板内的顺序，将玻璃板垂直安装到电泳槽上，拧紧；然后用1.0%琼脂胶封住底部，待用；

(3) 将模具倾斜45°，用摇晃均匀后的6%聚丙烯酰胺凝胶，缓缓倒入玻璃板的缝隙，至模具顶部为止；随后迅速插上梳子，仔细观察是否有气泡残留，确定好后，室温放置1~2h进行凝固；

(4) 凝固好后，放到加满1×TBE电泳缓冲液的电泳槽中，小心地拔出梳子，避免气泡产生，随后点样，然后进行电泳；

(5) 结束后，缓缓倒出缓冲液，取下胶板，从玻璃板中取出凝胶，先放入固定液中轻摇2~3min；在染色液中轻晃3~5min；再在蒸馏水中漂洗2~3次，每次时间不超过15s；随后放到显影液中轻轻摇晃，直至条带出现；最后观察后拍照分析。