[发明专利]一种利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F1

说明书

本发明涉及的一种利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F₁杂种的方法，依据可以生长出幼苗的试验材料，设计SSR分子标记引物的方法，以期达到真杂交种的有效鉴定手段。利用材料进行株高、株幅、叶刺、叶色、叶脉色、茎刺、茎色、花序、花色和花萼色等形态指标，与父母本进行形态学比较作为对照例。采取亲本和杂交种的叶片进行DNA提取，对带型稳定且清晰的条带的DNA进行SSR引物的PCR扩增，使用聚丙烯酰胺胶(PAGE)电泳分离扩增产物，具有父母互补型、父本型条带的杂交种即为真杂交种。本发明方法操作简单方便，鉴定快速，费用低，具有高准确度和通用性，可以对茄子不同栽培茄与野生茄杂交组合的杂交种真实性进行有效鉴定。

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，涉及到SSR分子标记鉴定方法，具体涉及一种利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F₁杂种的方法。

背景技术

茄子(Solanum melongena L.)是茄科茄属植物，是一种深受消费者喜爱的茄果类蔬。但茄子在生产上容易遭受到各种病虫的危害，如黄萎病、根结线虫等，而茄子野生资源中具有高抗病虫害的优良基因。因此，为了实现对栽培品种的改良，将通过各种方法把这些抗性基因导入到栽培茄中。而种间杂交是实现基因转移的重要途径，获得的种间杂种也随之增多。栽培茄与野生茄种间杂交存在单向障碍，将栽培茄作为母本更容易杂交成功，杂种鉴定是遗传育种的基础工作，如何快速准确鉴定出茄子杂交后代的真实性是遗传育种的基础工作。

除形态学鉴定外，分子标记技术被广泛运用于杂交后代的真实性鉴定当中。常见的SRAP分子标记技术属于显性标记，是通过后代是否具有父本特异条带作为杂种鉴定的手段。而此方法操作相对繁琐，花费较多的时间和较高的费用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F₁杂种的方法。是一种快速、简单、省时、准确的杂交种鉴定方法，该法可真实有效地应用于栽培茄与野生茄种间杂交F₁杂种真实性的鉴定。

实现上述技术问题的技术方案是：

本发明涉及一种利用SSR分子标记鉴定栽培茄与野生茄种间杂交F₁杂种的方法，具体包括以下步骤：

步骤一：种间杂交F₁杂种及其亲本的DNA提取；

步骤二：建立SSR反应体系及扩增反应程序；

步骤三：聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；

步骤四：杂交种真实性的鉴定；在杂交后代的扩增产物中，是否具有父母本互补型或父本型条带，若有则为真杂交种，反之，则为假杂交种。

进一步地，步骤一中，以亲本和杂交种植株的叶片为材料，提取DNA；提取的DNA

用1％的琼脂糖凝胶电泳进行纯度的检测。所述DNA样品置于-20℃保存。

进一步地，利用SSR标记引物emg01J09和emh21J12进行杂种鉴定；

引物emg01J09-F具有SEQID NO.1的核苷酸序列；

引物emg01J09-R具有SEQID NO.2的核苷酸序列；

引物emh21J12-F具有SEQID NO.3的核苷酸序列；

进一步地，所述SSR反应体系：6.7μl ddH₂O，1.0μl 10×Buffer，0.2μl dNTPs，1.0μl引物，0.1μl rTaq聚合酶、1.0μl DNA模板；