[发明专利]一种同时测定芍药种子中8种内源激素含量的HPLC方法

权利要求书

1.一种同时测定芍药种子中多种内源激素含量的HPLC方法，其特征在于：步骤如下：

a、制备供试品溶液：

取芍药种子粉末，以甲醇为溶剂提取，离心、浓缩，再分别经石油醚、乙酸乙酯萃取，浓缩，用流动相溶解、过滤，得供试品溶液；

b、制备对照品溶液：

取各激素对照品，混合，加乙腈溶解，配制成混合对照品溶液；

c、分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；

流动相：流动相A为体积分数为0.1％的磷酸水溶液，B为乙腈，梯度洗脱程序为：0.01～15min，5％～15％B；15～20min，15％～25％B；20～40min，25％～35％B；40～45min，35％～90％B；45～50min，90％B；

检测波长：分别为210nm和254nm；

d、根据检测结果计算得到芍药种子中的各激素含量；所述内源激素为玉米素、反式玉米素核苷、激动素、赤霉素、吲哚乙酸、水杨酸、脱落酸和吲哚丁酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，以甲醇为溶剂提取的方法为：取芍药种子粉末2重量份，加入体积分数为80％的甲醇溶液5体积份、石英砂0.02重量份及PVPP0.02重量份，研磨后，加入甲醇15体积份，4℃放置24h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，所述离心的条件为4℃，10000r/min离心10min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中，所述色谱柱的规格为：内径4.6mm，长度250mm，填料粒径5μm。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：色谱柱型号为Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中，所述梯度洗脱程序为：0.01～15min，5％B；15～20min，15％B；20～40min，25％B；40～45min，35％B；45～50min，90％B。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的方法，其特征在于：所述色谱条件的柱温为35℃；流速为1.0mL/min。

8.根据权利要求1-6任意一项所述的方法，其特征在于：所述供试品溶液的进样量为10μL。