[发明专利]一种鱿鱼生物活性肽及其制备方法

权利要求书

1.一种鱿鱼生物活性肽，其特征在于：其氨基酸序列为Glu-Leu-Val-Gly-Pro。

2.一种根据权利要求1所述的鱿鱼生物活性肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a)干燥制粉：收集鱿鱼墨并干燥，制得鱿鱼墨干粉；

b)预处理：按每1g鱿鱼墨干粉18～22ml水将鱿鱼墨干粉与水混合，在55～65℃搅拌2小时，制得预处理液；

c)初次酶解：将预处理液pH值调至7，并向其中加入2wt％的木瓜蛋白酶酶解3小时，之后在100℃中加热15分钟灭酶，制得初次酶解液；

d)再次酶解：将初次酶解液pH值调至10，在60℃中加热并向其中加入1.5wt％胰蛋白酶酶解3小时，之后调节pH至中性后在100℃下加热15分钟灭酶，制得再次酶解液；

e)浓缩干燥：将再次酶解液pH值调制4，然后在5000rpm下离心35分钟，离心后取上清液，并将上清液浓缩至1/20，然后用95vol％的乙醇进行醇沉，接着离心并取上清液在40℃下干燥，最后脱盐后制得鱿鱼墨酶解物；

f)分离纯化：将鱿鱼墨酶解物依次采用凝胶色谱柱层析法和高效液相色谱法分离纯化得到鱿鱼生物活性肽。

3.根据权利要求2所述的一种鱿鱼生物活性肽的制备方法，其特征在于所述步骤f分离纯化具体为：

一、凝胶色谱柱层析：取得鱿鱼墨酶解物用蒸馏水溶解成5mg/ml溶液，采用SephadexG-15凝胶色谱柱2.0cm×100cm进行分离纯化并收集，并于280nm测定吸光度，收集各峰的溶液，并按峰合并各峰的溶液；

二、高效液相色谱法分离纯化：将步骤一收集的溶液用高效液相色谱分离纯化，色谱条件如下：色谱柱为反相C18键合硅胶柱；流动相为水和乙腈中的至少一种；检测波长为280nm、254nm和214nm，收集主要色谱峰的溶液，冻干得到鱿鱼生物活性肽。

4.根据权利要求3所述的一种鱿鱼生物活性肽的制备方法，其特征在于：

所述步骤一中，Sephadex G-15凝胶色谱柱进行分离纯化前先将Sephadex G-15凝胶用超纯水煮1～2小时，并清除漂浮的杂质。

5.根据权利要求3所述的一种鱿鱼生物活性肽的制备方法，其特征在于：

所述步骤一中，分离纯化时的流速为0.6ml/min，并每经过3分钟收集一次分离纯化后的溶液。

6.根据权利要求3所述的一种鱿鱼生物活性肽的制备方法，其特征在于：

所述步骤二中，分离纯化时的流速为0.8ml/min。