[发明专利]一种鱿鱼生物活性肽及其制备方法

说明书

本发明涉及生物活性肽技术领域。本发明公开了一种鱿鱼生物活性肽，其氨基酸序列为Glu‑Leu‑Val‑Gly‑Pro；本发明还公开了一种鱿鱼生物活性肽的制备方法，其采用利用双酶法酶解从鱿鱼墨中制备获得鱿鱼生物活性肽。本发明中的鱿鱼生物活性肽对胃癌细胞SGC‑7901具有较好的抑制活性，其IC₅₀值为38.5μg/mL。

技术领域

本发明涉及生物活性肽技术领域，尤其是涉及一种鱿鱼生物活性肽及其制备方法。

背景技术

由于生物活性肽具有丰富的生理功能，如抑菌、降血压、增强免疫、抗氧化、抗肿瘤和调节血糖等，因而被越来越多的应用在疾病防治和保健食品等领域中；其中，对于抗肿瘤生物活性肽来说，由于其具有分子量小、肿瘤细胞穿透能力强、可提高免疫应答和抑制肿瘤血管形成等特点，因而逐渐成为肿瘤治疗研究的热点。

日本在生物活性肽食品开发方面处于世界领先水平，其已开发、上市的生物活性肽功能产品有低抗原食品、流动食品、婴儿食品、运动食品、降压食品以及促进钙吸收食品等等。而我国对活性肽的研究尚处于初级阶段，主要集中在食物蛋白的酶解产物和发酵制品中，成型的活性肽功能性食品和活性肽药物制剂鲜有报道。海洋环境复杂多变，其高盐、高压、低温、寡营养等独特的条件赋予了海洋生物复杂多变的形态和独特的机体代谢及防御系统。同时，海洋生物在生长和代谢过程中也产生了一些陆地生物所不具有的结构新颖、药效独特的生物活性物质。

鱿鱼墨汁中所含有的生物大分子多聚体的代称，是已知唯一能够保护生物体免受辐射伤害的天然内源生物聚合体，其含有多肽片断、酸性多糖、酪氨酸酶等多种生物活性成分。具有清除自由基和结合潜在毒性离子(如一些过渡金属)的特性，应用潜力巨大。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种鱿鱼生物活性肽，其来源于鱿鱼墨，具有抗肿瘤活性；

本发明还提供了一种利用双酶法酶解从鱿鱼墨中制备鱿鱼生物活性肽的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种鱿鱼生物活性肽，其氨基酸序列为Glu-Leu-Val-Gly-Pro。

一种鱿鱼生物活性肽的制备方法，包括以下步骤：

a)干燥制粉：收集鱿鱼墨并干燥，制得鱿鱼墨干粉；

b)预处理：按每1g鱿鱼墨干粉18～22ml水将鱿鱼墨干粉与水混合，在55～65℃搅拌2小时，制得预处理液；

c)初次酶解：将预处理液pH值调至7，并向其中加入2wt％的木瓜蛋白酶酶解3小时，之后在100℃中加热15分钟灭酶，制得初次酶解液；

d)再次酶解：将初次酶解液pH值调至10，在60℃中加热并向其中加入1.5wt％胰蛋白酶酶解3小时，之后调节pH至中性后在100℃下加热15分钟灭酶，制得再次酶解液；

e)浓缩干燥：将再次酶解液pH值调制4，然后在5000rpm下离心35分钟，离心后取上清液，并将上清液浓缩至1/20，然后用95vol％的乙醇进行醇沉，接着离心并取上清液在40℃下干燥，最后脱盐后制得鱿鱼墨酶解物；

f)分离纯化：将鱿鱼墨酶解物依次采用凝胶色谱柱层析法和高效液相色谱法分离纯化得到鱿鱼生物活性肽。

作为优选，步骤f分离纯化具体为：

一、凝胶色谱柱层析：取得鱿鱼墨酶解物用蒸馏水溶解成5mg/ml溶液，采用Sephadex G-15凝胶色谱柱2.0cm×100cm进行分离纯化并收集，并于280nm测定吸光度，收集各峰的溶液，并按峰合并各峰的溶液；