[发明专利]一种微型器官的处理方法有效
申请号: | 201710776920.6 | 申请日: | 2017-08-30 |
公开(公告)号: | CN107560917B | 公开(公告)日: | 2019-10-11 |
发明(设计)人: | 陈萍;李田;张亮;陈曦;李亚腾 | 申请(专利权)人: | 西南大学 |
主分类号: | G01N1/30 | 分类号: | G01N1/30;G01N1/28 |
代理公司: | 重庆弘旭专利代理有限责任公司 50209 | 代理人: | 文巍 |
地址: | 400716*** | 国省代码: | 重庆;50 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 器官 透析液 透析 配方 特异性结合反应 大分子物质 二甲基亚砜 亚细胞定位 荧光显微镜 定量分析 分子物质 结构形态 内部器官 生物领域 微小动物 细胞水平 组织切片 组织细胞 体积比 乙醇 碱液 通透 定型 灵敏 定性 体内 细胞 观察 研究 | ||
1.一种微型器官的处理方法,包括:采用体积比为1:1000的Tween-20和0.01M PBS配置的处理液中轻微震荡微型器官4次,固定前1次,固定后透析前1次,透析后2次;依次将固定后的微型器官在透析液Ⅰ中1~10℃透析2~5天,在透析液Ⅱ中-40~-15℃透析4~8h,所述透析液Ⅰ配方为1M Tris碱液中含10%的Triton-X 100、2%的BSA 以及0.05M 的NaCl,pH6.8;透析液Ⅱ配方为体积比为4:1的乙醇和二甲基亚砜(DMSO);所述微型器官是指动物体内的微型器官,厚度在1mm以下。
2.如权利要求1所述的微型器官的处理方法,所述固定是采用溶于0.1M PBS的4%多聚甲醛在1~10℃中浸泡微型器官12~16h。
3.如权利要求1或2所述微型器官的处理方法,所述处理液处理步骤为两段式,每段采用处理液浸泡3-25min。
4.如权利要求1所述微型器官的处理方法,包括以下步骤:
(1)摘取新鲜的微型器官,在PBS中剔除粘附在上的其它杂物;
(2)用处理液分为两个阶段处理微型器官,每阶段3~5min;
(3)用多聚甲醛在1~10℃中固定微型器官12~16h;
(4)用处理液分为两个阶段处理微型器官,每阶段10~15min;
(5)将微型器官在透析液Ⅰ中1~10℃透析2~5天;
(6)将微型器官在透析液Ⅱ中-40~-15℃透析4~8h;
(7)用处理液分为两个阶段处理微型器官,每阶段10~15 min;
(8)将微型器官进行免疫反应、原位杂交或细胞学其它操作;
(9)用处理液处理微型器官2-3次,每次处理分两个阶段,每段15~25 min;
(10)依次放于50-100%的乙醇浓度由低到高的梯度中脱水5~30min。
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