[发明专利]一种微型器官的处理方法

说明书

本发明提供了一种微型器官的处理方法，包括：依次将固定后的微型器官在透析液Ⅰ中1～10℃透析2～5天，在透析液Ⅱ中‑40～‑15℃透析4～8h，所述透析液Ⅰ配方为1M Tris碱液中含10%的Triton‑X 100、2%的BSA以及0.05M的NaCl，pH 6.8；透析液Ⅱ配方为体积比为4:1的乙醇和二甲基亚砜。本发明是对微型器官进行定型和整体通透处理，保持其原有形态，实现器官和组织细胞结构形态不变而大分子物质能充分渗透到各个部位的目的。经过这样处理的微型器官可以利用分子物质的特异性结合反应，再通过相应的观察手段如荧光显微镜等，就可以准确、灵敏地在微型器官上对分子进行细胞或亚细胞定位、定性以及相对定量分析。本发明针对生物领域微小动物内部器官很小、难以实施组织切片技术的困境，发明了一种适合体内微型器官在分子和细胞水平上进行研究的方法。

技术领域

本发明涉及组织器官的处理方法，特别涉及动物体内的微小组织器官。

技术背景

动物机体是各种组织器官的结合体，动物的生命活动必需依靠各个组织器官正常行使各自的生理学和生物学功能来维持。研究组织器官是深入认识动物以及控制和利用动物的前提基础和重要纽带。

医学诊断上常用的组织器官病理检测方法-组织化学，伴随分子及细胞生物学的发展，在生物领域升华为免疫组织化学。免疫组织化学是将抗原与抗体结合的免疫反应特异性和组织化学的可见性巧妙地结合起来，在细胞、亚细胞水平检测抗原物质，对其进行定位、定性及相对定量分析，从而可大大提高研究深度和水平。因此，免疫组织化学技术50年代以来得到快速发展并广泛应用各个研究领域。科学研究中通用的免疫组化技术是通过对保持原有形态的组织进行连续切片、以每张切片作为抗原-抗体特异性反应单元为基础来进行蛋白分子在组织中的定性、定位等分析的。但免疫组织化学实验包括固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→脱蜡→水化→抗原修复→抗体结合染色等多个环节，步骤繁琐，技术难度高，要想最终获得满意结果，需集扎实的技术理论和丰富的操作经验为一体方可如愿。稍有不慎，组织细胞发生变形或抗体分子渗透性不好，切片组织染色模糊，不能清楚观察结果。实践证明，对于一些肉眼下不易观察的微型组织器官，这个实验技术开展起来非常困难，尤其是内部组织器官，经过透明处理后光射反差小，可视度低，操作中容易造成1材料发生丢失、2包埋和切片时很难把控材料的位置和方向、3操作当时不可知切片组织是否缺损或完整，这样所获的切片组织在方向位置以及完整性上都不能确定。而免疫组化就是以连续组织切片和每张切片的完整性为基础来判断反应结果在器官中的具体位置进行定性、定位分析的。因而，实验中即使获得一些免疫染色效果好的切片，因不能在器官中进行具体定位而丧失其作用和意义，更不可能拿到全面可靠的结果了。所以，用现有的免疫组织化学手段对内部微型器官进行蛋白分子的定位定性分析，几乎不能获得成功。

地球上大部分动物属于外观尺寸较小的小型动物，如种类繁多的昆虫、绝大部分其它无脊椎动物以及少数离奇的脊椎动物等。通常，微小动物的器官很小，原本组织解剖学研究条件要求高，难度大，尤其是一些厚度小于1mm、肉眼下观察困难、最外层因非角质化或骨质化、一经透明处理后光射反差很小可视度趋近于0的内部微型器官(如不像家蚕幼虫体壁和头部等这样的外部组织器官，为了抵抗尖锐物损伤内部组织，最外层被角质化骨质化，经过透明处理后还保留一定的光射反差和可视度)，在分子水平上进行科学研究时，因没有合适可行的方法严重阻碍了相关研究，成为其深入研究的瓶颈。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对于动物体内的微型器官的处理方法，尤其是适用于动物内部器官的处理和研究，其厚度往往在1mm以下，而最外层为非角质化或骨质化的薄膜，柔软，不能抵抗尖锐物具的机械损伤。

本发明的目的是通过以下措施实现的：