[发明专利]一种香蕉束顶病毒侵染性克隆及构建方法

权利要求书

1.一种香蕉束顶病毒侵染性克隆重组为病毒的方法，其特征在于所述方法包括下述步骤：

1）. 以感染香蕉束顶病毒的香蕉总DNA为模板，对目的片段进行扩增，扩增的引物对如下所示：

DNA-R：正向引物DNA-R 965F-H3，5'-AAGCTTACACGCTATGCCAATCGTACAC-3'，反向引物DNA-R 111R-Xb，5'-CCCGGGGCGCCATTTCTGTCGACG-3'；

DNA-U3：正向引物DNA-U3 840F-H3，5'-AAGCTTGCTTAGCCACGAAGGAAGG-3'，反向引物DNA-U3 155R-Xb，5'-CCCGGGGACCTTCGGTCAAACCCAG-3'；

DNA-S：正向引物DNA-S 830F-Xb，5'-CCCGGGGGTTGATTGGTCTATCGTATCGC-3'，反向引物DNA-S 144R-H3，5'-AAGCTTGGACGGTTCCCGCCTGTT-3'；

DNA-M：正向引物DNA-M 809F-H3，5'-AAGCTTCGGGGGTTGATTGGTCTATCG-3'，反向引物DNA-M 199R-Xb，5'-CCCGGGCGGAAGTTTCCGGACGTCA-3'；

DNA-C：正向引物DNA-C 858F-Xb，5'-CCCGGGGAATCGGGGGTTGATTGGGC-3'，反向引物DNA-C 237R-H3，5'-AAGCTTCTCCTCCGATGAGTGATTTCG-3'；

DNA-N：正向引物DNA-N 867F-Xb，5'-CCCGGGCGCTTAAGGGCCGCAGG-3'，反向引物DNA-N276R-H3，5'-AAGCTTCGCTTCTGCTTCGCATACG-3'；

Sat4：正向引物Sat4 914F-H3 ，5'-AAGCTTCGCTATGACAATCGTACGC-3'，反向引物Sat4111R-Xb，5'-CCCGGGCCTCGCTCCGTTGCG-3'；

S2：正向引物S2 935F-H3，5'-AAGCTTCGCCAAGCAACCGCGTG-3'，反向引物S2 116R-Xb，5'-CCCGGGCTCTCTCGGCTGCGGAG-3'；

相应的各引物扩增的产物片段的序列分别为：DNA-R：SEQ ID NO.1，DNA-U3：SEQ IDNO.2， DNA-S：SEQ ID NO.3，DNA-M：SEQ ID NO.4， DNA-C：SEQ ID NO.5，DNA-N：SEQ IDNO.6，Sat4：SEQ ID NO.7，和S2：SEQ ID NO.8；

将上述各片段各插入pCAMBIA3300中，即得重组质粒pDNA-R、pDNA-U3， pDNA-S， pDNA-M， pDNA-C，pDNA-N，pSat4和pS2；

2）将pDNA-R、pDNA-U3， pDNA-S， pDNA-M， pDNA-C，pDNA-N，pSat4， pS2分别转化农杆菌或转化大肠杆菌，将转化后的农杆菌或转化大肠杆菌分别等比例混合瞬时注射烟草或香蕉，通过同源重组，即产生至少2个拷贝的串联病毒片段的重组质粒，即获得了香蕉束顶病毒重组病毒。