[发明专利]婴幼儿食品及奶粉中低聚半乳糖含量离子色谱法测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学领域，尤其是涉及含低聚半乳糖的制品中，低聚半乳糖含量的测定方法。采用带积分安培检测器的离子色谱仪，检测制品中的低聚半乳糖含量。

背景技术

低聚半乳糖，简称GOS，是一种具有天然属性的功能性低聚糖，其分子结构一般是在半乳糖或葡萄糖分子上连接1-7个半乳糖基，即Gal-(Gal)n-Glc/Gal(n为0-6)，分子量约300-2000。

低聚半乳糖在人母乳中含量较多，婴儿体内的双歧杆菌菌群的建立依赖于母乳中的GOS。GOS直接进入大肠，能够被人体肠内益生菌所利用，能够抑制人体肠内有害菌的生长繁殖，有较强的耐酸性、耐热性。低聚半乳糖成为了婴幼儿食品、奶粉中的重要成分。

低聚半乳糖属于低聚糖，其分离检测一直是当前研究的难点和重点。当前低聚半乳糖的检测主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱质谱法等等。由于样品中游离的乳糖、半乳糖含量，影响测定结果准确性的重要因素。

发明内容

本发明解决的技术问题是：为了克服现有婴幼儿食品及奶粉中低聚半乳糖含量测定方法中，干扰物质过多造成的测试结果不准确的缺陷，提供一种婴幼儿食品及奶粉中低聚半乳糖含量的离子色谱法测定方法。将婴幼儿食品及奶粉样品酶解，将低聚糖转化成单糖，用带积分安培检测器的离子色谱仪分别检测酶解前的样品和酶解后的样品，折算出低聚糖的含量。本发明可以把乳糖和半乳糖目标峰分开，灵敏度和检出限较低。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种含低聚半乳糖制品中低聚半乳糖含量的测定方法，该方法包括：

(1)将含低聚半乳糖的溶液与淀粉酶接触，得到第一溶液；

(2)将等量的两份第一溶液，分别与β-半乳糖苷酶溶液和磷酸盐缓冲液接触，得到第二溶液和第三溶液；

(3)在第二溶液和第三溶液中分别加入乙腈，过滤，然后将第二溶液和第三溶液冷却处理；

(4)将步骤(3)冷却处理后的第二溶液和第三溶液稀释，得到稀释液A和稀释液B；以及

(5)采用离子色谱法测试稀释液A中的半乳糖浓度，稀释液B中的乳糖浓度和半乳糖浓度，得到低聚半乳糖的含量。

优选的，步骤(4)中，将骤(3)冷却处理后的第二溶液和第三溶液稀释至半乳糖和/或乳糖的线性区间是0.5～20μg/mL，然后0.20-0.30μm滤膜过滤，优选采用0.22μm滤膜过滤。

优选的，所述离子色谱法，流动相：A为H₂O，B为100mM NaOH，C为100mM NaOH+500mM NaHAC；

梯度洗脱条件为：0-37min，A：B：C＝90:10：0；37-42min，A：B：C＝0:0：100；42-67min，A：B：C＝90:10：0。

优选的，步骤(1)中，将含低聚半乳糖的溶液与淀粉酶在40-80℃，优选60℃水浴振荡25-60分钟，优选30分钟，然后冷却；其中，淀粉酶的用量为：8-9g/L，优选8.33g/L。

优选的，所述磷酸盐缓冲液的pH值为5.5-6.5，优选6，磷酸盐缓冲液为0.2mol/l

优选的，所述β-半乳糖苷酶溶液为含有β-半乳糖苷酶溶液的磷酸盐缓冲液，其中β-半乳糖苷酶含量为12-17g/100ml磷酸盐缓冲液，优选β-半乳糖苷酶含量15g/100ml磷酸盐缓冲液。

优选的，步骤(2)中，所述β-半乳糖苷酶溶液与第一溶液的体积比用量为10:0.6，所述磷酸盐缓冲液与第一溶液的体积比用量为10:0.6。

优选的，步骤(2)中，将等量的两份第一溶液，分别与β-半乳糖苷酶溶液和磷酸盐缓冲液，50-70℃水浴振荡60-90分钟，优选60℃水浴震荡60分钟，然后100℃沸水浴8-20min，优选10min。

优选的，低聚半乳糖GOS的含量由下述公式计算得到

GOS＝K×(T-G-L/1.9)；

其中，K为换算系数，由下述公式计算得到，

在该公式中，n为低聚半乳糖的平均聚合度；

T为含低聚半乳糖的溶液中总半乳糖的含量，单位为毫克每百克(mg/100g)，由下述公式计算得到，

c_t为稀释液A中的半乳糖的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；

f为第二溶液的稀释倍数；

m为含低聚半乳糖的溶液中的固含量，单位为克(g)；

G为含低聚半乳糖的溶液中天然半乳糖的含量，单位为毫克每百克(mg/100g)：