[发明专利]一种细胞染色方法

权利要求书

1.一种细胞染色方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

1)预处理

提供待染色的细胞，并用细胞固定液固定所述细胞，然后将所述细胞均匀涂片得到待染色的涂片；

2)第一次染色

2.1)对所述涂片上的细胞样本进行抗原修复，使得隐蔽的抗原决定簇暴露；加入过氧化氢消除内源性过氧化物酶；洗涤后加入封闭液进行封闭；

2.2)滴加抗肿瘤标志蛋白的单克隆抗体，孵育后洗涤；

2.3)滴加特异性结合所述单克隆抗体的辣根过氧化物酶标记二抗工作液，孵育后形成抗原-单克隆抗体-酶标二抗复合物，洗涤；

2.4)滴加DAB(3，3’-二氨基联苯胺)底物进行显色；去离子水洗涤后加入苏木素复染；

3)第二次染色

将步骤2.4)获得的样本放入乙醇，即≥90％(v/v)中固定，然后用巴氏染色液对样本进行染色，所述细胞包括肿瘤细胞，所述抗肿瘤标志蛋白为HPV E7蛋白。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞为宫颈脱落细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞为脱落的宫颈鳞状上皮细胞。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2.4)后包括步骤：

2.5)对涂片进行脱水处理，二甲苯透明后中性树胶封片；和

2.6)褪片脱胶

取步骤2.5)获得的样本放入二甲苯中静置，然后放入无水乙醇中洗涤。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述细胞固定液为液基细胞固定液。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述液基细胞固定液包括中性福尔马林、4％多聚甲醛。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，涂片完成后使用乙醇，即≥90％(v/v)固定20-60min，风干20min以上。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2.1)中，将样本放入40-60％(v/v)乙醇中复水5-15分钟后，去离子水中浸泡至少30秒，然后将样本置于pH值为9.0的Tris-EDTA抗原修复液中进行抗原修复，使得隐蔽的抗原决定簇暴露。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2.1)中，加入1-5％的过氧化氢进行处理5-15分钟，消除内源性过氧化物酶。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2.1)中，滴加100-300ul封闭液并于湿盒中进行封闭40-80分钟。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述封闭液为含质量分数为5-15％的新生牛血清或胎牛血清、或0.2-0.5％的牛血清白蛋白的封闭液。

12.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤2.5)中，将样本依次放入65-85％乙醇、90-98％乙醇、无水乙醇中进行脱水。

13.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤2.6)中，将样本放入二甲苯中静置至少30分钟，轻轻移去盖破片，二甲苯洗涤后放入无水乙醇中洗涤。

14.一种细胞染色系统，其特征在于，所述细胞染色系统执行权利要求1所述的细胞染色方法。