[发明专利]一种细胞染色方法

说明书

本发明提供了一种细胞染色方法，该方法同时提供细胞形态学和癌症标志物E7癌蛋白的表达鉴定，从而提供细胞检测的多参数信息。所述方法实验结果表明，本发明的方法对细胞进行染色，能够有效避免漏检，同时极大地缩短了读片时间，有效地提高了判读的准确性。本发明的方法可以对含有肿瘤细胞的临床样本进行细胞染色和鉴定，也可以用于实验室研究目的的肿瘤细胞染色。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体地涉及一种细胞染色方法。

背景技术

宫颈癌是女性生殖系统的常见恶性肿瘤，位居女性恶性肿瘤第二位，晚期癌5年生存率低，在世界范围内具有较高的发病率和死亡率。中国每年宫颈癌的新发病例13万以上，占世界总发病数的28％；中国宫颈癌发病率由上世纪90年代到现在，每年以2％～3％的速度递增，且发病平均年龄在10年间下降约5岁，明显趋于年轻化。发达国家通过上半个多世纪的时间普及了宫颈癌筛查，使得宫颈癌的发病率及死亡率明显下降。而在发展中国家，宫颈癌发病率和致死率依旧很高，主要发生于贫困地区及未进行妇女病筛查的地区。

细胞形态学检查是目前宫颈癌普查的常规使用方法。对于30岁以上的妇女，如果出现接触性出血情况，应常规进行宫颈癌筛查。首要做的就是细胞形态学检查。液基细胞学检查是采用液基薄层细胞检测系统检测宫颈细胞并进行细胞学分类诊断，它是目前国际上较先进的一种宫颈癌细胞学检查技术。但大量的临床实践证明，宫颈癌筛查面临着细胞学检测敏感度较低(50～70％)，受取样、制片、染色、阅片水平等多种因素影响。细胞学判读要求有形态学依据具有不可规避的主观性，并造成病理医生工作负担极其繁重。另外，在抗肿瘤药物开发中，同样存在大量的需要对肿瘤细胞样本进行检测染色的工作，以判断肿瘤细胞的状态。

因此，本领域技术人员致力于开发灵敏度更高、特异性更好的细胞染色方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细胞染色方法，该方法同时提供细胞形态学和根据癌蛋白表达的细胞标记和鉴别技术，从而提供细胞检测的多参数信息。该方法可以缩短读片时间、同时有效提高判读的准确性。用于检测宫颈上皮脱落细胞的检测可以提高早期诊断癌前病变的灵敏度，减少对早期癌症的漏检率。

本发明的第一方面，提供了一种细胞染色方法，所述方法包括步骤：

1)预处理

提供待染色的细胞，并用细胞固定液固定所述细胞，然后将所述细胞均匀涂片得到待染色的涂片；

2)第一次染色

2.1)对所述涂片上的细胞样本进行抗原修复，使得隐蔽的抗原决定簇暴露；加入过氧化氢消除内源性过氧化物酶；洗涤后加入封闭液进行封闭；

2.2)滴加抗肿瘤标志蛋白的单克隆抗体，孵育后洗涤；

2.3)滴加特异性结合所述单克隆抗体的辣根过氧化物酶标记二抗工作液，孵育后形成抗原-单克隆抗体-酶标二抗复合物，洗涤；

2.4)滴加DAB(3，3’-二氨基联苯胺)底物进行显色；去离子水洗涤后加入苏木素复染；

3)第二次染色

将步骤2.4)获得的样本放入乙醇(≥90％(v/v))中固定，然后用巴氏染色液对样本进行染色。

在另一优选例中，所述方法为非诊断目的。

在另一优选例中，所述细胞包括肿瘤细胞。

在另一优选例中，所述细胞为宫颈脱落细胞。

在另一优选例中，所述细胞为脱落的宫颈鳞状上皮细胞。

在另一优选例中，所述抗肿瘤标志蛋白为HPV E7蛋白。

在另一优选例中，所述步骤2.4)后包括步骤：