[发明专利]一种提高羔羊体外胚胎发育能力的方法

说明书

本发明公开了一种提高羔羊体外胚胎发育能力的方法。本发明提供了一种促进羔羊卵子体外成熟的方法，为将离体羔羊的卵母卵丘细胞复合体在添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液中进行体外成熟培养，实现促进羔羊卵子体外成熟。本发明用添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液来培养羔羊卵母细胞，卵子成熟后通过体外受精生产体外胚胎，可以显著提高羔羊胚胎的发育能力。该方法简单易行，材料来源方便。

技术领域

本发明属于胚胎工程领域，尤其涉及一种提高羔羊体外胚胎发育能力的方法。

背景技术

羔羊胚胎体外生产技术(Juvenile in vitro Embryo Transfer，JIVET)是集超数排卵、活体采卵、卵子体外成熟、体外受精、胚胎体外培养和胚胎移植等技术为一体的综合技术，其最大特点是以性成熟前幼羔为卵子供体来生产体外胚胎。研究表明，利用相同的激素处理方案，幼羔(4-8周龄)的卵泡发育数是成年羊的10倍以上。因此，幼羔是生产体外胚胎的有效卵子供源。而且，以幼羔为卵子供体，还可以将羊的繁殖年龄提前一年以上。因此，JIVET技术是一项极具应用价值的快速繁育技术。

然而，尽管利用激素诱导可以获得大量羔羊卵子，但这些卵子的质量层次不齐，导致羔羊体外胚胎的发育能力远低于成年羊胚胎。羔羊体外胚胎发育能力低的主要原因是卵子成熟度不够，导致受精后发育潜力不足。在体内，卵泡是卵子发育和成熟的重要场所，卵泡液是卵泡的主要成份，为卵子的发育成熟提供了重要微环境。

这是目前JIVET技术的主要缺陷。如果能够提高羔羊胚胎的发育能力，就会进一步提升JIVET技术的总体效率，提高这一技术的生产应用水平。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种促进羔羊卵子体外成熟的方法.

本发明提供的方法，为将离体羔羊的卵母卵丘细胞复合体在添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液中进行体外成熟培养，实现促进羔羊卵子体外成熟。

上述方法中，所述添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液中，所述成年羊卵泡液的体积百分浓度为10％-50％(体积比体积)。

上述方法中，所述添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液中，所述成年羊卵泡液的体积百分浓度为20％。

上述方法中，

所述成年羊卵泡液为离体成年羊卵泡液；

所述离体成年羊卵泡液来源于激素诱导成年羊(可以屠宰死亡后取或活体取)或非激素诱导成年羊(屠宰死亡后摘取卵巢然后吸取卵泡液)。

上述方法中，所述添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液由TCM199溶液、发情羊血清、FSH(促卵泡素)、LH(促黄体素)、17β-estradiol(17β-雌二醇)、streptomycin(链霉素)、penicillin(青霉素)和所述成年羊卵泡液组成；

或，所述发情羊血清、所述FSH、所述LH、所述17β-estradiol、所述streptomycin、所述penicillin和所述成年羊卵泡液的配比200μL：10μg：10μg：1μg：100μg：100IU和所述成年羊卵泡液的配比为100-500μL。

上述方法中，所述发情羊血清在所述促卵子成熟培养液中的体积百分含量为10-50％；

或，所述发情羊血清在所述促卵子成熟培养液中的体积百分含量为20％；

所述FSH在所述促卵子成熟培养液中的浓度为10μg/mL；

所述LH在所述促卵子成熟培养液中的浓度为10μg/mL；

所述β-estradiol在所述促卵子成熟培养液中的浓度为1μg/mL；

所述streptomycin在所述促卵子成熟培养液中的浓度为100μg/mL；