[发明专利]一种纯合转基因油菜的制备方法

权利要求书

1.一种纯合转基因油菜的制备方法，其特征在于，其制备过程包括下述步骤：

供体油菜的选择；

花序浸染法浸染供体油菜；

双单倍体诱导系技术对供体油菜进行后代诱导纯合；

种子收集；

转基因油菜筛选。

2.根据权利要求1所述的一种纯合转基因油菜的制备方法，其特征在于，所述供体油菜的选择步骤包括选择初花期前的油菜。

3.根据权利要求1所述的一种纯合转基因油菜的制备方法，其特征在于，所述花序浸染法浸染供体油菜步骤包括将供体油菜的花序浸染在具有目标转基因的农杆菌菌液中。

4.根据权利要求1所述的一种纯合转基因油菜的制备方法，其特征在于，所述双单倍体诱导系技术对供体油菜进行后代诱导纯合步骤包括收集双单倍体诱导系的油菜花粉，将油菜花粉涂抹在所述花序浸染法浸染供体油菜的柱头上，并进行套袋处理。

5.根据权利要求1所述的一种纯合转基因油菜的制备方法，其特征在于，所述转基因油菜筛选步骤包括抗生素鉴定、PCR鉴定、倍性鉴定、分子纯合性鉴定而进行油菜植株筛选。

6.根据权利要求5所述的一种纯合转基因油菜的制备方法，其特征在于，所述抗生素鉴定步骤包括将收集到的种子播种于抗生素培养基中，通过光照培养筛选出正常的油菜植株。

7.根据权利要求5所述的一种纯合转基因油菜的制备方法，其特征在于，所述PCR鉴定步骤包括采用CTAB法提取植株的DNA，设计引物，进行PCR检测，筛选出阳性的油菜植株。

8.根据权利要求7所述的一种纯合转基因油菜的制备方法，其特征在于，所述PCR鉴定步骤之后还包括表型鉴定，所述表型鉴定包括将阳性的油菜植株进行抗生素或病菌接种处理，筛选出具有良好抗药性且正常的油菜植株。

9.根据权利要求5所述的一种纯合转基因油菜的制备方法，其特征在于，所述倍性鉴定步骤包括利用流式细胞仪分析油菜植株的倍性，筛选出正常倍性的油菜植株。

10.根据权利要求5所述的一种纯合转基因油菜的制备方法，其特征在于，所述分子纯合性鉴定步骤包括将第一代植株进行自交得到第二代植株，对所述第二代植株进行多种性状鉴定，通过观察性状分离现象推测转基因第一代植株的分子纯合性。