[发明专利]一种蜂蜜中蔗糖快速检测的预制试剂及其保存、检测方法

说明书

本发明提供了一种蜂蜜中蔗糖快速检测的预制试剂及其保存、检测方法，所述蜂蜜中蔗糖快速检测的预制试剂由以下重量份的原料组成：填充剂75～83份，显色剂0.5～1.5份，磷酸盐15～20份，蔗糖异构酶0.5～1.2份，葡萄糖基寡糖氧化酶0.6～1.2份和辣根过氧化物酶0.5～1.2份。本发明便于携带，操作过程简单、高效，安全性高，抗干扰能力强，不需要大型仪器设备，检测结果直观可见；检测灵敏度高，使用分光光度计检测限可达1.0mg/L；检测方法回收率高、重现性好。

技术领域

本发明涉及食品安全快速检测技术领域，尤其涉及一种灵敏度高、操作简单的蜂蜜中蔗糖快速检测的预制试剂及其保存、检测方法。

背景技术

蜜蜂为采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然甜物质。蜂蜜中含有与人体血清浓度相近的多种无机盐和维生素、铁、钙、铜、锰、钾、磷等多种有机酸及有益人体健康的微量元素，还含有糖类和多种氨基酸，具有极高的保健作用和营养价值，深受消费者的青睐。近年来，国内和国际市场对蜂蜜的需求量不断扩大，然而蜂蜜的产量难以满足市场的需求，且由于蜜源的不同，蜂蜜的种类繁多，成分复杂，使得蜂蜜品质的检测技术存在很大局限。蔗糖含量是蜂蜜质量的重要指标之一，《食品安全国家标准-蜂蜜》(GB14963-2011)规定，桉树蜂蜜、柑橘蜂蜜、紫苜蓿蜂蜜、荔枝蜂蜜和野桂花中蔗糖含量≤10％，其它蜂蜜≤5％。

关于蔗糖的检测方法主要有高效液相色谱法、酸水解法和酶水解法。高效液相色谱法由于要使用大型仪器，不适合于现场快速检测和基层实验室检测。酸水解法是将蔗糖在70℃左右的酸性条件下水解成葡萄糖和果糖，再在沸腾条件下以斐林试剂滴定，计算出蔗糖含量；酶水解法，是用蔗糖酶将蔗糖水解成葡萄糖和果糖，再利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖，换算出蔗糖含量。蜂蜜中除了蔗糖外，还含有大量的葡萄糖和果糖，要测定水解前后样品中的葡萄糖含量的差值，才能换算成蔗糖含量，但由于蜂蜜中蔗糖含量通常是葡萄糖含量的1/5到1/10，同时样品需要稀释倍数很高，测定的误差很大，不能满足检测需要。此外，酸水解法需要在沸腾条件下滴定，操作比较繁琐、条件要求较为苛刻。因此，酸水解法和酶水解法不适合蜂蜜样品中蔗糖的快速检测。

中国专利文献上公开了“蜂蜜品质快速检测方法”，其公告号为CN101393122A，该发明利用蜂蜜的近红外各成分含量之间的数学模型对蜂蜜各成分含量进行测定，该方法原理复杂，检测效率低，不利于大规模推广使用。

发明内容

本发明为了克服现有蜂蜜中蔗糖含量的测定效率低、误差大的问题，提供了一种灵敏度高、抗干扰能力强的蜂蜜中蔗糖快速检测的预制试剂。

本发明又提供了一种使用方便、存储效果好的蜂蜜中蔗糖快速检测的预制试剂的保存方法。

本发明还提供了一种测定回收率高、重现性好的蜂蜜中蔗糖快速检测的预制试剂的检测方法，该法适用于基层实验室检测和现场快速检测。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种蜂蜜中蔗糖快速检测的预制试剂，所述蜂蜜中蔗糖快速检测的预制试剂由以下重量份的原料组成：填充剂75～83份，显色剂0.5～1.5份，磷酸盐15～20份，蔗糖异构酶0.5～1.2份，葡萄糖基寡糖氧化酶0.6～1.2份和辣根过氧化物酶0.5～1.2份。

本发明蜂蜜中蔗糖快速检测的预制试剂配方体系中所选的蔗糖异构酶，葡萄糖基寡糖氧化酶和辣根过氧化物酶具有专一性，抗干扰能力强，蜂蜜中的其它糖类，特别是含量较高的葡萄糖和果糖均对测定没有影响。检测机理具体为：蜂蜜中的蔗糖在蔗糖异构酶的作用下异构生成异麦芽酮糖，后者在葡萄糖基寡糖氧化酶的作用下，氧化生成3-酮-异麦芽酮糖，同时产生过氧化氢；过氧化氢在辣根过氧化物酶作用下氧化成水，同时使底物DPD(N,N-二乙基-对苯二胺)变成阳离子型DPD，后者呈现粉红色，粉红色深浅与产生的过氧化氢量呈线性有关，继而与样品中最初的蔗糖浓度线性相关，因此，可利用粉红色深浅或吸光度值来测定蔗糖浓度。