[发明专利]一种鉴定烟草中蛋白与蛋白组的多维液相色谱质谱联用法

说明书

本发明提供一种鉴定烟草中蛋白与蛋白组的多维液相色谱质谱联用法，具体包括以下步骤：1）将烟叶样品，采用三氯乙酸‑丙酮沉淀法、苯酚法分别提取蛋白，再将蛋白合并后复溶，获得蛋白样品溶液；2）将蛋白样品溶液进行酶解、脱盐、干燥，获得肽段干粉作为试样；3）将制备的试样依次通过第一维液相色谱、第二维液相色谱进行捕集后洗脱分离，再由质谱进行检测。本发明提供的该种方法，最大程度保留样本中的蛋白，大大提高了色谱的峰容量，具有检测通量高、灵敏度高，鉴定出的蛋白组量多的优点。

技术领域

本发明属于烟草蛋白与蛋白组研究技术领域，涉及一种鉴定烟草中蛋白与蛋白组的多维液相色谱质谱联用法，具体涉及一种提取、酶解、测定新鲜烟叶中蛋白与蛋白组多维液相色谱质谱联用法。

背景技术

随着各种检测技术发展，蛋白质组的概念于1994年被提出，它是后基因组时代功能基因组学研究的新兴学科和热点领域。蛋白质组学是从整体、动态、网络的水平上对蛋白质进行研究，研究蛋白质组是研究认识复杂生命活动的要求。

烟草(Nicotiana tabacum)是重要的经济作物，同时作为复杂的模式植物，烟草在植物遗传、发育、生理、生化和转基因等领域的研究中有代表性，因此开展烟草蛋白组学研究具有重要意义。

目前，检测烟草中蛋白与蛋白组的方法具有检测通量低、鉴定出的蛋白组量少等缺陷，因此有必要对现有技术进行进一步的研究与探讨，寻找一种更好的提取、鉴定烟草中蛋白与蛋白组的方法。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种鉴定烟草中蛋白与蛋白组的多维液相色谱质谱联用法，用于解决现有技术中缺乏检测通量高、灵敏度高、鉴定出的蛋白组量多的鉴定烟草中蛋白与蛋白组的方法的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种鉴定烟草中蛋白与蛋白组的多维液相色谱质谱联用法，具体包括以下步骤：

1)将烟叶样品，采用三氯乙酸-丙酮沉淀法、苯酚法分别提取蛋白，再将蛋白合并后复溶，获得蛋白样品溶液；

2)将步骤1)所得蛋白样品溶液进行酶解、脱盐、干燥，获得肽段干粉作为试样；

3)将步骤2)中制备的试样进行二维液相色谱质谱联用法检测，依次通过第一维液相色谱、第二维液相色谱进行捕集后洗脱分离，再由质谱进行检测。

优选地，步骤1)中，所述三氯乙酸-丙酮沉淀法为常规用于提取蛋白的三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法。具体来说，所述三氯乙酸-丙酮沉淀法为根据《Sample extractiontechniques for enhanced proteomic analysis of plant tissues》(Isaacson T；Damasceno CM；Saravanan RS；He Y；CataláC；SaladiéM；Rose JK，Nature Protocols，2006，1，769-774)记载的三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法。

优选地，步骤1)中，所述苯酚法为常规用于提取蛋白的苯酚法。具体来说，所述苯酚法为根据《Sample extraction techniques for enhanced proteomic analysis ofplant tissues》(Isaacson T；Damasceno CM；Saravanan RS；He Y；CataláC；SaladiéM；Rose JK，Nature Protocols，2006，1，769-774)记载的苯酚法进行提取蛋白。

优选地，步骤1)中，所述复溶采用的溶剂为4-8M(mol/L)尿素水溶液。更优选地，所述溶剂为6M(mol/L)尿素水溶液。