[发明专利]一种微生物检测方法

说明书

本发明公开了一种微生物检测方法，包括以下步骤：构建抗体标记磁珠微球，将所需检测的标靶微生物抗体与磁珠微球结合，形成复合体；制备特异识别靶标微生物，该微生物能与靶标微生物结合，形成带有外源核酸的复合物，该外源引进的核酸序列与细菌基因组序列无相关；而后偶联，形成微生物‑抗体‑磁珠复合体；通过上述复合体吸附标靶微生物的特定核酸序列，而后对其脱附、扩增、检测，得到微生物检测结果。本发明能够快速、精确地完成各种细菌、病毒、病原体、细胞或蛋白等大分子微生物的检测。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种微生物检测方法。

背景技术

传统的微生物检测方法为培养法，国标沿用，虽然此种方法可靠准确，但由于要先增菌后血清学鉴定或者其他生化方法鉴定，往往需要三天时间甚至更长时间，在一些易变质的食品或者出关的食品上，并没有那么长的时间来等待检测，快速便捷检测微生物方法的开发丞需解决。

发明内容

本发明所要解决的技术问题就是针对上述背景技术的不足，提供一种微生物检测方法，在实现精确检测的前提下，充分满足简单、快速、成本低廉的要求。

为解决上述技术问题，本发明提供的一种微生物检测方法，包括以下步骤：

1)，构建抗体标记磁珠微球，将所需检测的标靶微生物抗体与磁珠微球结合，形成复合体；

2)，配置特异微生物识别靶标，该微生物识别靶标能与靶标微生物结合，形成带有外源核酸的复合物，将步骤1)产物与其偶联，形成微生物-抗体-磁珠复合体；

3)，将标靶微生物与步骤2)所得的复合体混合，使标靶微生物的特定核酸序列与复合体吸附，吸附完成后分离出吸附特定核酸序列的复合体；

4)，采用磁性分离的方法，将步骤3)所得的复合体中特定核酸序列分离；

5)，扩增步骤4)所得的特定核酸序列，而后检测，得到标靶微生物的检测结果。

在上述技术方案中，所述靶标微生物可以是细菌、病毒、病原体、细胞或蛋白。

在上述技术方案中，所述步骤1)中，磁珠微球直径为20-25nm。

在上述技术方案中，所述步骤1)中，抗体可以是一种或多种。

在上述技术方案中，所述步骤3)中，偶联采用EDC和/或NHS方法进行偶联。

在上述技术方案中，所述步骤4)中，分离出吸附特定核酸序列的复合体采用超滤管纯化的方式。

在上述技术方案中，所述步骤6)中，采用PCR或SDA法进行扩增。

在上述技术方案中，所述步骤6)中，采用荧光定量PCR法或核酸胶体金检测卡对扩增后的核酸序列检测。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明中抗体只能与活的微生物结合，扩增外源核酸序列，既避免了死菌造成的假阳性，又免去了提基因组的繁琐步骤，和这过程中可能带来的污染；同时，一个微生物上可以有多个抗体结合位点，也就是可以结合多个核酸，将信号放大，可以实现单个菌检测；本发明富集微生物后一小时内能报告结果，大大缩短了检测时长。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施例作进一步的详细描述：

本发明的微生物检测方法，包括以下步骤：

1)，构建抗体标记磁珠微球，将所需检测的标靶微生物抗体与磁珠微球结合，形成复合体；

2)，配置特异微生物识别靶标，该微生物识别靶标能与靶标微生物结合，形成带有外源核酸的复合物，将步骤1)产物与其偶联，形成微生物-抗体-磁珠复合体；