[发明专利]磁微粒增强免疫比浊检测盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及到生物检测领域，特别是涉及到一种磁微粒增强免疫比浊检测盒及其应用。

背景技术

现有的采用免疫比浊检测试剂检测血清的方法，一般使用胶乳增强技术，将抗体连接到胶乳微粒上，样本中的抗原与抗体发生免疫反应结合后，胶乳微粒亦产生聚集，放大了免疫反应的信号，从而达到增强体系检测信号的目的，在全自动生化分析仪上完成样本的检测。

而采用化学发光免疫检测试剂检测血清的方法，则采用磁微粒增强技术，将抗体连接到磁微粒上，样本中的抗原与抗体发生免疫反应结合后，利用磁微粒超顺磁性，将结合物分离下来，除去未结合杂质，加入化学发光检测物质(如酶标记抗体和酶催化的化学发光底物或发光物质直接标记的抗体)，通过检测发光强度达到检测的目的，需在化学发光分析仪上完成样本的检测。

然而现有的这两种检测血清的方法都有其缺点。例如使用胶乳增强免疫比浊试剂检测血清的方法，由于采用小粒径的胶乳微粒分离需高速冷冻离心机，分离时间长(30min-60min)，导致制造成本高。同时，由于离心时间长，离心后胶乳微粒需通过超声或均质机才能达到均匀分散的目的，过程中可能会破坏胶乳微粒上抗体的活性。

而采用化学发光免疫检测试剂检测血清的方法，则需特定检测仪器，发光检测体系价格高，试剂成本高。

发明内容

本发明的主要目的为提供一种磁微粒增强免疫比浊检测盒及其应用，能以较低的成本检测血清浓度，同时提高血清的检测效率。

本发明提出了一种磁微粒增强免疫比浊检测盒，包括R1试剂、R2试剂和校准品；

所述R1试剂包括第一缓冲液、增强剂、第一稳定剂和第一防腐剂；

所述R2试剂包括第二缓冲液，包括磁微粒-抗体复合物、第二稳定剂和第二防腐剂。

优选地，所述第一缓冲液包括PBS缓冲液、Tris缓冲液、MOPSO缓冲液、Good’s缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或几种。

优选地，所述第一缓冲液包括0.02M的PBS缓冲液，其pH为7.4。

优选地，所述第一增强剂包括PEG-300、PEG-2000、PEG-4000、PEG-6000和PEG-8000中的一种或几种。

优选地，所述第一增强剂包括5％的PEG-6000。

优选地，所述第一稳定剂或第二稳定剂包括蛋白质、非离子表面活性剂中的一种或几种。

优选地，所述第一稳定剂包括0.5％BSA、0.1M甘氨酸，0.5％的曲拉通-100；

所述第二稳定剂包括0.5％BSA，0.1M甘氨酸。

优选地，所述第一防腐剂或第二防腐剂包括叠氮钠、Proclin300、抗生素中的一种或几种，所述抗生素包括四环素、庆大霉素、甲氧青霉素。

优选地，所述第一防腐剂包括0.1％的Proclin300；

所述第二防腐剂包括0.05％的Proclin300。

优选地，所述磁微粒-抗体复合物中的磁微粒的粒径为50nm-300nm。

优选地，所述校准样包括稀释液和重组蛋白，稀释液添加有稳定剂和防腐剂。

本发明还提出了R2试剂的制备方法，包括以下步骤：

将磁微粒放在磁力架上，吸附磁微粒，去掉保存液，用一定浓度缓冲液重悬磁微粒，使其均匀分散；

将EDC和Sulfo-NHS平衡至室温，配成指定浓度的溶液，按一定比例加入到重悬后的磁微粒中，震荡活化，获得活化的磁微粒；

将所述活化的磁微粒与抗体偶联，获得磁微粒-抗体复合物；

向所述磁微粒-抗体复合物中加入一定体积的封闭液，震荡混匀，在指定温度下反应指定时间；

反应后的磁微粒-抗体复合物经磁场分离后，去掉上层清液，用保存缓冲液清洗；

用保存缓冲液重悬清洗后的磁微粒-抗体复合物，得到R2试剂。

优选地，所述活化的磁微粒大小为50nm-300nm。

优选地，所述活化的磁微粒大小为100nm。

优选地，所述MES缓冲液浓度为0.02M-0.2M，pH为5.0-6.5。

优选地，所述MES缓冲液浓度为0.05M，pH为6.0。

优选地，加入的EDC和Sulfo-NHS与磁微粒的质量比为1:50至1:1。

优选地，加入的EDC和Sulfo-NHS与磁微粒的质量比为1:20。

优选地，所述将所述活化的磁微粒与抗体偶联，获得磁微粒-抗体复合物的步骤，包括：