[发明专利]一种丙二酸单对硝基苄酯的制备方法

权利要求书

1.一种丙二酸单对硝基苄酯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将式Ⅰ化合物与式Ⅱ化合物溶于有机溶剂中，发生成酯反应得到中间体式Ⅲ化合物；

2)将式Ⅲ化合物置于水或含水低级醇中，在无机碱或者氰基水解酶催化下发生水解反应得到丙二酸单对硝基苄酯(式Ⅳ化合物)。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，当X为Cl或者Br，且M为Na或者K发生反应时，所述式Ⅰ化合物与式Ⅱ化合物的摩尔比为1:1.0～1.2；所述的有机溶剂选自乙腈、甲醇和乙醇中的一种或两种以上的混合物，优选为乙腈；反应温度为50℃～150℃，优选为100～120℃。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，当X为OH，且M为H发生反应时，所述式Ⅰ化合物与式Ⅱ化合物的摩尔比为1:1.1～2.0；所述的有机溶剂为甲苯；反应在酸催化下回流带水，所用酸为硫酸、磷酸、对甲苯磺酸中的一种或两种以上的混合物，优选为对甲苯磺酸。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中低级醇选自C₁-C₄醇，优选为甲醇。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中无机碱选自氢氧化钠和氢氧化钾，优选为氢氧化钠；式Ⅲ化合物与碱的摩尔比为1:1.0～1.2，优选为1.05。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)碱催化下发生水解反应，反应温度控制在0～50℃，优选为20～40℃。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中所述氰基水解酶为GenBank中编号为ABD98457.1，ABO46008.1，BAA02684.1的氨基酸序列。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中氰基水解酶为游离的氰基水解酶、含氰基水解酶的菌体细胞、固定在支持物上的氰基水解酶和固定在支持物上的含氰基水解酶的菌体细胞中的一种或多种。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中氰基水解酶从Acidovorax facilis 72W，Rhodococcus rhodochrous Tg1-A6，Alcaligenes faecalisJM3中获取，或者可翻译为上述氨基酸序列的碱基序列连接至载体上并转化进入微生物宿主细胞后表达得到；所述微生物宿主细胞选自丛毛单胞菌、棒状杆菌、短杆菌、红球菌、固氮菌、柠檬酸杆菌、大肠杆菌、梭状芽胞杆菌、克雷白氏杆菌、沙门氏菌、乳酸杆菌、曲霉、糖酵母、接合酵母、毕赤酵母、克鲁维酵母、假丝酵母、汉森氏酵母、杜氏藻、德巴利民酵母、毛霉菌、球拟酵母、甲基杆菌、芽孢杆菌、假单胞菌、根瘤菌和链霉菌，优选为大肠杆菌。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)生物酶催化水解时，反应液中式Ⅲ化合物的浓度为10mM～1M；反应温度控制在0～50℃，优选30～40℃；所述反应液中氰基水解酶的量为1～100g/L。