[发明专利]小鼠肺癌原位荷瘤放疗模型的建立与应用

权利要求书

1.一种可用于评估放射治疗效果的具有正常免疫功能小鼠的原位荷瘤模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：利用野生型小鼠为载体，利用基因重组技术将萤火虫荧光素酶基因引入人肺腺癌LLC细胞株中，通过亚克隆筛选获得稳定表达荧光素酶的肿瘤克隆细胞株，然后采用重组的LLC细胞接种于小鼠肺部构建而成。

2.根据权利要求1所述的可用于评估放射治疗效果的具有正常免疫功能小鼠的原位荷瘤模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)将萤火虫荧光素酶Luciferase质粒采用脂质体转染法转入人肺腺癌LLC细胞，流式筛选出稳定表达荧光素酶报告基因的重组细胞株并进行扩大培养；

b)将得到的重组人肺腺癌LLC细胞经消化后重悬于DMEM培养基中，在具有正常免疫功能的C57/BL6小鼠右下肺接种该重组人肺腺癌LLC细胞，即得到可用于评估放射治疗效果的具有正常免疫功能小鼠的原位荷瘤模型。

3.根据权利要求1或2所述的可用于评估放射治疗效果的具有正常免疫功能小鼠的原位荷瘤模型的建立方法，其特征在于，所述的重组人肺腺癌LLC细胞采用注射的方式接种于小鼠肺部。

4.根据权利要求2所述的可用于评估放射治疗效果的具有正常免疫功能小鼠的原位荷瘤模型的建立方法，其特征在于，所述的步骤a中的转染试剂为lip3000转染试剂。

5.根据权利要求2所述的可用于评估放射治疗效果的具有正常免疫功能小鼠的原位荷瘤模型的建立方法，其特征在于，所述的步骤b中的重组人肺腺癌LLC细胞浓度为2×10⁶个/ml。

6.根据权利要求1所述的可用于评估放射治疗效果的具有正常免疫功能小鼠的原位荷瘤模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

A)将人肺腺癌LLC细胞加入含体积浓度10％FBS的DMEM体外传代培养；

B)胰酶消化离心后，将人肺腺癌LLC细胞铺入24孔板中，细胞浓度为5×10⁴个/ml；

C)12h后使用lip3000将萤火虫荧光素酶质粒转入人肺腺癌LLC细胞，萤火虫荧光素酶质粒与lip3000的比例为1:1.5；转染24h后进行换液，并使用荧光显微镜观察转染效果；

D)转染72h后将24孔板内细胞铺入96孔板中进行亚克隆筛选，选出高表达萤火虫荧光素酶基因的人肺腺癌LLC细胞，并进行扩增；

E)使用DMEM培养基重悬吹匀重组的人肺腺癌LLC细胞，配制成2×10⁶浓度的细胞悬液后备用；

F)在C57BL/6小鼠右下肺注射接种该重组人肺腺癌LLC细胞，注射细胞悬液25μL。