[发明专利]一种柞蚕微孢子虫模板DNA的提取方法及其在分子诊断方面的应用有效
申请号: | 201710801468.4 | 申请日: | 2017-09-07 |
公开(公告)号: | CN107400668B | 公开(公告)日: | 2021-03-02 |
发明(设计)人: | 李佩佩;范琦;米锐;岳冬梅;赵振军;叶博;王林美;张波 | 申请(专利权)人: | 辽宁省农业科学院大连生物技术研究所 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6893;C12Q1/04;C12R1/90 |
代理公司: | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人: | 刘慧娟;李馨 |
地址: | 116000 辽*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 柞蚕 孢子 模板 dna 提取 方法 及其 分子 诊断 方面 应用 | ||
1.一种柞蚕微孢子虫模板DNA的获取方法,其特征在于:用碱溶液对待测样本进行裂解处理,用磁珠进行DNA的富集、分离与纯化;所述碱溶液为无机碱溶液;所述碱溶液的浓度是0.05~1M;所述碱溶液中还含有浓度低于10%的十二烷基硫酸钠;所述裂解处理的处理时间为1分钟~40天;处理温度为-20-40℃;所述处理过程还包含零到多次的冻融过程,单次冷冻时间为10分钟~40天;在用磁珠进行DNA的富集、分离与纯化的过程中,将磁性微球直接放入含有待测样本的混合溶液中,然后利用外部磁场进行分离,分离后采用ddH2O、TE缓冲液或PCR反应液洗脱所述磁珠为含有二氧化硅和四氧化三铁成分的磁性微球;所述用磁珠进行DNA富集的过程,是将磁珠或者磁珠的悬浮液加入裂解液中,混匀,静置片刻;其中,所述裂解液中还加有无水乙醇,无水乙醇与裂解液的体积比为0.7~1:1。
2.一种柞蚕微孢子虫分子诊断试剂盒,所述试剂盒包括权利要求1所述的柞蚕微孢子虫模板DNA的获取方法中所使用的试剂组合。
3.根据权利要求2所述的柞蚕微孢子虫分子诊断试剂盒,其特征在于:所述试剂盒中还包括一组引物,所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1~2所示。
4.如权利要求1所述方法在以非诊断目的检测柞蚕微孢子虫方面的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述检测方法中的DNA扩增技术选自:常规PCR,巢式PCR,重组酶聚合酶扩增,环介导等温扩增或实时荧光定量PCR。
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