[发明专利]一种胶质瘤1p/19q联合缺失的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体来说是一种胶质瘤1p/19q联合缺失的检测方法。

背景技术

胶质瘤是起源于神经胶质细胞的最常见的原发性中枢神经系统肿瘤，占中枢神经系统肿瘤总数的30％左右，脑恶性肿瘤总数的80％左右，胶质瘤其中一个最显著的临床特点就是呈浸润性，无包膜与周围正常脑组织之间无明显分界，手术难以完全切除，术后复发率高，目前临床治疗方式仍然以手术切除为主，辅以放射治疗、化学治疗、免疫治疗和基因治疗等措施，疗效虽然有了一定的提升，但总体预后仍很差，生存期大多为5-10年，患者健康相关生活质量差，同时也给家庭、社会造成称重的负担。

1号染色体短壁(1p)与19号染色体长臂(19q)的联合性缺失是胶质瘤，尤其是少突胶质细胞瘤重要的分子指标，在病理诊断、放化疗疗效评价及临床预后预测具有重要意义，Reifenberger J等最早发现少突胶质瘤细胞瘤中存在较高的1p/19q的联合缺失。随后研究也表明，1p/19q联合缺失在少突胶质瘤常见，发生率可达50％-80％，而在星型细胞瘤中，出现频率低，在病理诊断方面，正是由于1p/19q联合缺失在少突胶质细胞瘤与星型细胞瘤存在显著差异，检测1p/19q联合缺失有助于形态学表现不典型少突胶质细胞的诊断与鉴别。

1p/19q联合缺失是少突胶质细胞瘤化疗敏感性及预后的重要预测指标，1998年，Cairncross等在回顾性分析了PCV化疗方案治疗间变性少突胶质细胞瘤的疗效后发现，具有1p/19q联合缺失的肿瘤对PCV化疗方案的反应率为100％，而仅有25％的无1p/19q联合缺失的肿瘤对PCV化疗方案有反应，无1p/19q联合缺失患者的5.7倍，除PCV方案外，具有1p/19q联合缺失的少突胶质细胞肿瘤对替莫唑胺有较高的反应率，在一项前瞻性临床研究中，Brandes等发现具有1p/19q联合缺失的间变或复发少突胶质细胞瘤中，59.4％的肿瘤对替莫唑胺敏感，而仅有34.3％的无联合缺失的肿瘤对替莫唑胺敏感，另外，具有联合缺失中生存期为45.3个月，较无缺失患者的18.8个月明显延长。

目前文献报道1p/19q联合缺失的检测方法主要由PCR微卫星分析法、比较基因组杂交法，对操作者技术、设备要求程度较高，过程较复杂，耗费时间长，多在实验室内开展，难以大规模服务临床，且检测不是很准确，需要进行改进。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中的检测效率低、操作不便、不能大规模应用的缺陷，而提供一种胶质瘤1p/19q联合缺失的检测方法。

本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：本发明公开了一种胶质瘤1p/19q联合缺失的检测方法，具体步骤如下：

(1)、用检测者的脑组织石蜡切片提取DNA；

(2)、以提取的DNA为模板进行PCR反应：用SEQ NO 1和SEQ NO 2为引物扩增1P-D1S436位点，用SEQ NO 3和SEQ NO 4为引物扩增1P-D1S468位点，用SEQ NO 5和SEQ NO 6为引物扩增1P-D1S489位点，用SEQ NO 7和SEQ NO 8为引物扩增19q-D19s112位点，用SEQ NO 9和SEQ NO 10为引物扩增19q-D19s217位点，用SEQ NO 11和SEQ NO 12为引物扩增19q-D19s902位点；

(3)、将上述6对引物进行普通PCR扩增后的PCR扩增产物用2％的琼脂糖凝胶电泳；

(4)、对2％的琼脂糖凝胶电泳图进行分析总结。

作为优选，所述的步骤(1)中，采用天跟石蜡包埋组织DNA快速提取试剂盒对检测者的脑组织石蜡切片进行DNA的提取。

作为优选，所述的步骤(1)中，提取出的DNA浓度不低于10ng/ul，260/280＝1.9±2。

作为优选，所述的步骤(2)中，针对1P-D1S436、1P-D1S468、1P-D1S489、19q-D19s112、19q-D19s217和19q-D19s902的6个位点的引物组如下：

针对1P-D1S436位点引物组为：

SEQ NO 1：TGAATGTGTCTCCAGTGTTAGC

SEQ NO 2：CTGTAGAGCAATCTGGCAATATGT

针对1P-D1S468位点引物组为：

SEQ NO 3：AATTAACCGTTTTGGTCCT

SEQ NO 4：GCGACACACACTTCCC

针对1P-D1S489位点引物组为：