[发明专利]一种用于CYP2C19*2检测的电化学传感器

权利要求书

1.一种用于CYP2C19*2检测的电化学传感器，其特征在于包括以下步骤：

(1)羧基化的富勒烯(c-C₆₀)-二氧化铈(CeO₂)-铂纳米粒子(PtNPs)-ssDNA检测探针的制备；

(2)建立电化学DNA生物传感器，测定CYP2C19*2基因，绘制标准曲线。

2.根据权利要求1所述c-C₆₀-CeO₂-PtNPs-ssDNA复合物的制备过程，其特征包括以下步骤：

(1)c-C₆₀-CeO₂纳米复合材料的制备：

首先，将10mg c-C₆₀溶解于5mL超纯水中，置于室温下超声处理15min，得到均匀的悬浮液。接着，将10mL 0.025M Ce(NO₃)₃·6H₂O与10mL 0.025M的HTMA混合。然后将两种溶液混合并保持在80℃的水浴中5小时，室温冷却后用超纯水离心洗涤3次。随后，将所制备的沉淀物在60℃下干燥，供下一步使用。接着，将20mg c-C₆₀/CeO₂复合物分散在5mL乙醇中，超声处理15分钟，得到分散溶液。然后，将0.1mL的APTES与上述溶液混合，并置于70℃条件下保持1.5小时。冷却至室温后，用超纯水离心洗涤，得到的c-C₆₀/CeO₂复合体。最终将制备的产品在50℃下干燥，再进一步使用。

(2)c-C₆₀-CeO₂-PtNPs纳米复合材料的制备：

通过NaBH₄还原法合成了c-C₆₀/CeO₂/PtNPs。首先，向1mL的c-C₆₀/CeO₂溶液(2mg/mL)中加入1mL的H₂PtCl₆(1％)，并超声处理5分钟。然后在搅拌条件下将2mL NaBH₄(0.1M)溶液滴加到混合物中，反应30分钟，然后离心洗涤3次，并溶解在1mL的超纯水中进一步使用。

(3)c-C₆₀-CeO₂-PtNPs-ssDNA复合物的制备

将所制备的1mL c-C₆₀/CeO₂/PtNPs与200μL(1μM)氨基修饰的信号探针(SP)混合，并在4℃下轻轻搅拌24小时。然后，将1mg BSA与1mL TE缓冲液混合后，加入到c-C₆₀/CeO₂/PtNPs溶液中，继续在4℃下轻轻搅拌4小时，用于阻断非特异性结合位点。然后，以8000rpm离心c-C₆₀/CeO₂/PtNPs/SP/BSA生物共轭物，用PBS洗涤3次，分散在1mL杂交溶液中进一步使用。

3.根据权利要求1所述的建立电化学DNA生物传感器，测定CYP2C19*2基因，绘制标准曲线，其特征在于包括以下步骤：

(1)分别用0.3和0.05μm的Al₂O₃粉末将电极抛光成镜面，然后分别按超纯水、无水乙醇、超纯水的顺序超声电极各5min，室温干燥备用；

(2)将6μL电极修饰材料金纳米粒子@铁的金属有机框架(AuNPs@Fe-MOFs)滴加在电极表面，室温干燥。

(3)将10μL，100μg mL^-1亲和素结合在干燥后的电极表面(4℃，12h)。

(4)用超纯水将电极冲洗干净后滴加10μL，1μM生物素标记的DNA捕获探针溶液，4℃孵育12h。

(5)用超纯水将孵育后的电极冲洗干净后滴加6μL，1％的BSA溶液室温孵育30min。

(6)将上述BSA封闭后的电极用清洗缓冲液(10mM Na₂HPO₄，2mM KH₂PO₄，37mM NaCl，2.7mM KCl，pH7.4)冲洗干净并在氮气中干燥。

(7)将不同浓度的目标DNA滴加在电极上并置于37℃杂交2h。

(8)在干燥后的电极上滴加10μL检测探针混合液置于37℃孵育2h。

(9)将孵育后的电极用清洗缓冲液冲洗干净后置于氮气中干燥。

(10)将电极置于5mL，0.1M PBS(0.1M Na₂HPO₄，0.1M KH₂PO₄，0.1M KCl)中进行表征，每隔50s加入20μL，1.4M H₂O₂，测量其计时电流变化电流值。

(11)根据所得电流变化值与CYP2C19*2基因DNA片段浓度呈线性关系，绘制工作曲线。