[发明专利]利用环介导等温扩增技术检测食源性蜡样芽孢杆菌的方法及引物有效
| 申请号： | 201710804909.6 | 申请日： | 2017-09-08 |
| 公开（公告）号： | CN107475401B | 公开（公告）日： | 2021-03-19 |
| 发明（设计）人： | 徐云明;卞蓉蓉 | 申请（专利权）人： | 江苏农林职业技术学院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/085 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王艳丽;许丹丹 |
| 地址： | 212400 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 环介导 等温 扩增 技术 检测 食源性蜡样 芽孢 杆菌 方法 引物 | ||
1.一种利用环介导等温扩增技术检测食源性蜡样芽孢杆菌的引物，包括外引物和内引物，其特征在于，外引物的碱基序列为：
F3：5’-GATACATCTTCAATCGCTGG-3’
B3：5’-GGAAGTATACTAAATCACCTGG-3’；
内引物的碱基序列为：
FIP 5’-TGAATCCACTGCAATCAAAACCATTTTTAAATGGTTCACCATACAGAACA-3’
BIP 5’-TGGTCATAAAGGCGCTCGTCTTTTCTAGTTTTTGTTTTAGAGCTCCAG-3’。
2.一种非疾病诊断目的的利用环介导等温扩增技术检测食源性蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括： 提取待检测样品的 DNA；
以所述的 DNA 为模板，利用权利要求 1 所述的引物进行 LAMP 反应；
对反应产物进行鉴定，判断待检测样品中是否含有蜡样芽孢杆菌；
LAMP 反应体系为：6-8 mM Mg2+，1.4-1.6 mM dNTPs，1.0-1.2 M 甜菜碱，0.2-0.3 μM外引物，1.4-1.6 μM 内引物，1-1.5 μL Bst DNA 聚合酶，2.5-3 μL 反应缓冲液，1-2 μLgDNA， ddH2O 补至 25 μL。
3.根据权利要求 2 所述非疾病诊断目的的利用环介导等温扩增技术检测食源性蜡样芽孢杆菌的方法， 其特征在于，LAMP 反应的温度为 65-67 ℃。
4.根据权利要求 2 所述非疾病诊断目的的利用环介导等温扩增技术检测食源性蜡样芽孢杆菌的方法， 其特征在于，LAMP 反应的时间为 60-65 min。
5.根据权利要求 2 所述非疾病诊断目的的利用环介导等温扩增技术检测食源性蜡样芽孢杆菌的方法， 其特征在于，对反应产物进行琼脂糖凝胶电泳分析鉴定。
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