[发明专利]一种糖肽或糖蛋白富集材料及其制备和应用

权利要求书

1.一种糖肽或糖蛋白富集材料，是一种基于酰肼策略的糖链可释放糖基化肽段/蛋白富集材料，其特征在于：

所述糖肽/糖蛋白富集材料，首先以硅胶颗粒或者聚合物颗粒为基质，第一步在颗粒表面修饰上巯基，然后通过巯基与二硫键的交换反应制备得到表面富含酰肼基团的富集材料；在基质微球与酰肼基团中间有二硫键相连。

2.按照权利要求1所述的富集材料，其特征在于：所述基质微球颗粒为硅胶颗粒，或者表面带有环氧或者醛基的聚合物颗粒。

3.按照权利要求1所述的富集材料，其特征在于：所述基质微球颗粒为核-壳或全多孔结构的硅胶颗粒或者聚合物颗粒，其微球粒径在500nm～20μm之间。

4.一种权利要求1-3任一所述富集材料的制备方法，其特征在于：

a)颗粒表面修饰巯基的过程：

1)对于硅胶颗粒，将活化后的硅胶颗粒分散在甲苯中，超声，加入带有硫醇基团的硅烷化试剂，搅拌回流6-30h；之后依次使用甲苯、甲醇和丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤2～5遍，在真空干燥箱中至恒重；

或者，2)对于表面带有醛基的聚合物颗粒，分散于5-100mM,pH 5-9的磷酸盐缓冲液中，加入1-10mg/mL的氰基硼氢化钠，加入带有巯基或者二硫键基团的氨基试剂，20-60℃震荡反应5-30h；之后依次使用水，Tris-HCl重复洗涤2～5遍，在真空干燥箱中至恒重；

或者，3)对于表面带有环氧的聚合物颗粒，分散在100-2000mM的NaOH溶液中，加入带有巯基或者二硫键基团的氨基试剂，在30-60℃震荡反应5-30h；之后依次使用水，Tris-HCl重复洗涤2～5遍，在真空干燥箱中至恒重；

如若上述2)或3)中加入的是带有巯基基团的氨基试剂，不用继续处理，直接待用；如若加入的是带有二硫键基团的氨基试剂，微球干燥后重新分散在pH 5.0-9.0的缓冲溶液中，加入还原试剂，在30-60℃震荡反应0.5-3h,断裂二硫键生成巯基微球，之后使用水洗涤2～5遍，在真空干燥箱中至恒重；

b)酰肼微球的制备：将得到的巯基微球颗粒分散于pH 5.0-9.0的缓冲溶液中，加入带有二硫键的酰肼化合物，在20-60℃下反应4-48小时；依次使用反应溶剂、水、10-100mM醋酸钠洗涤微球，重复洗涤2～5遍，在真空干燥箱中至恒重即得糖链可释放的糖基化肽段/蛋白富集材料。

5.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤a所用的硅烷化试剂具有如下结构：

其中X代表甲氧基或者乙氧基，m的值为1-4；

其中硅胶颗粒与硅烷化试剂的加入量质量比为1:0.05至1:1。

6.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于：

表面带有醛基的聚合物颗粒和表面带有环氧的聚合物颗粒为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯聚合物颗粒中的一种或二种以上；

带有巯基基团的氨基试剂为半胱胺，半胱氨酸，氨基苯硫酚以及其它同时含有氨基-NH₂和巯基-SH的化合物中的一种或二种以上；

带有二硫键基团的氨基试剂为胱胺，胱氨酸以及其它同时含有氨基-NH2和二硫键-S-S-的化合物中的一种或二种以上；

步骤a所用的聚合物颗粒与氨基试剂的加入量质量比为1:0.01至1:0.2。

7.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤a和c所使用的还原剂为二硫苏糖醇、三(2-羧乙基)膦中的一种或两种，加入的量为10-1000M，步骤c中所用碘乙酰胺的量为还原剂摩尔浓度的1.0-3.0倍。

8.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于：

带有二硫键的酰肼化合物为包含有如下结构的化合物：

其中m的值为1-3；

步骤b所用的酰肼化合物加入量与微球加入质量比为1:0.1-1:10。