[发明专利]一种氨肽酶及其编码基因和应用有效
| 申请号： | 201710812644.4 | 申请日： | 2017-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN107400666B | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 叶茂;邓毛程;李静;张远平;陈维新;刘慧平 | 申请（专利权）人： | 广东轻工职业技术学院 |
| 主分类号： | C12N9/48 | 分类号： | C12N9/48;C12N15/57;C12N15/70;C12P21/06 |
| 代理公司： | 44245 广州市华学知识产权代理有限公司 | 代理人： | 苏运贞;裘晖<国际申请>=<国际公布>= |
| 地址： | 510300 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 氨肽酶 及其 编码 基因 应用 | ||
1.一种氨肽酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种核苷酸序列，其特征在于：是编码权利要求1所述的氨肽酶的核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的核苷酸序列，其特征在于：所述的核苷酸序列是为无内含子，具有1485bp完整的开放读码框的序列。
4.根据权利要求3所述的核苷酸序列，其特征在于：所述的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.权利要求1所述的氨肽酶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）将权利要求2～4任一项所述的核苷酸序列克隆至表达载体中，再转入表达细胞中，得到含有重组载体的细胞；
（2）对步骤（1）得到的含有重组载体的细胞进行培养，经IPTG诱导，从培养物分离、纯化，获得氨肽酶。
6.根据权利要求5所述的氨肽酶的制备方法，其特征在于：
步骤（1）中所述的表达载体为pET-32a(+)；
步骤（1）中所述的表达细胞为大肠杆菌BL21(DE3)；
步骤（2）中所述的培养的培养基为含100µg/ml氨苄青霉素的LB液体培养基；
步骤（2）中所述的诱导的具体步骤如下：当含有重组载体的细胞生长至OD600=1.0时加入IPTG至终浓度0.8mM，20℃、200 r/min下培养20h。
7.权利要求1所述的氨肽酶在制备呈味肽中的应用。
8.根据权利要求7所述的氨肽酶在制备呈味肽中的应用，其特征在于包括如下步骤：将所述的氨肽酶加入到含有蛋白底物的水解反应体系中，在25～35℃条件下进行酶水解反应2～6 h，得到相应的呈味肽。
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