[发明专利]一种生物微乳液小胶束、膀胱癌细胞悬液及小鼠气囊膀胱癌模型的构建方法

说明书

本发明公开了一种生物微乳液小胶束、膀胱癌细胞悬液及小鼠气囊膀胱癌模型的构建方法，属于癌症模型构建技术领域。该生物微乳液小胶束是将PAMAM用促肿瘤生长液配置成10％的PAMAM溶液；将COOH‑PEG‑OH加入到10％PAMAM溶液中，混合均匀；将5％醛基化的右旋糖酐与上述溶液进行混合，获得生物微乳液小胶束。该细胞悬液是将经过消化处理后的对数期膀胱癌细胞与生物微乳液小胶束进行混合获得的。本发明还提供了一种小鼠气囊膀胱癌模型的构建方法。本发明膀胱癌细胞悬液可以使肿瘤成团生长，防止癌细胞移位，并且能够促进肿瘤生长。气囊膀胱癌模型利用气囊代替膀胱，可用于药物灌注，成功率高，成瘤周期短。

技术领域

本发明涉及一种生物微乳液小胶束、膀胱癌细胞悬液及小鼠气囊膀胱癌模型的构建方法，属于癌症模型构建技术领域。

背景技术

现有的小鼠肿瘤模型的建立常用到生物胶(基质胶，matrigel)配制细胞悬液以利于细胞团聚，增加肿瘤种植的成功率，但使用生物胶有时出现肿瘤细胞在悬液中聚集而无法获得足够的营养，最终造成种瘤失败。同时生物胶会造成肿瘤团块缺血缺氧，导致肿瘤生长缓慢甚至停滞。目前，小鼠膀胱癌模型分为皮下瘤模型和原位瘤模型，皮下瘤模型多采取将肿瘤细胞种植于皮下完成。原位瘤模型分为自发成瘤模型与移植瘤模型，移植瘤模型是破坏小鼠膀胱粘膜后将肿瘤细胞种植于膀胱，自发成瘤模型是持续喂养小鼠含有化学药物的水而诱导肿瘤生成。

化疗药灌注治疗是膀胱癌术后最重要的治疗方法，但因小鼠膀胱体积较小，现有的小鼠膀胱癌模型多采用药物静脉注射治疗，但静脉注射是经血给药，给药方式不同于灌注治疗，不能准确地反应药物的疗效和副作用。

现有的小鼠膀胱癌模型主要存在以下问题：1、皮下瘤模型虽然成功率高、操作简便，但药物治疗时只可采用静脉给药的方式，不能使用现在临床上药物灌注的方法，由于药物灌注和静脉注射引起的副作用种类和程度不尽相同，这使得对药物疗效的评价存在偏差，因此皮下瘤模型不能准确评价药物灌注的副作用；2、原位癌模型中的移植瘤模型虽然可以模拟膀胱癌的生长环境且可以进行灌注治疗，但灌注治疗过程中容易造成膀胱破裂导致小鼠死亡，此种方式构建模型的死亡率可达30％(Zhang N,Dongyang L I,Shao J,etal.Animal models for bladder cancer:The model establishment and evaluation(Review)[J].Oncology Letters,2015,9(4):1515-1519.)；3、原位癌模型中的自发成瘤模型，由于需要持续喂养小鼠含有化学药物的水进而诱导肿瘤生成，因此存在耗时过长的缺陷，往往需要2-5个月的时间诱导肿瘤的发生(Weldon T E,Soloway M S.Susceptibilityof urothelium to neoplastic cellular implantation[J].Urology,1975,5(6):824-827)，这会过多的耗费人力物力并显著延长实验周期。

发明内容

为解决现有生物胶配置细胞悬液种瘤后造成肿瘤细胞在悬液中聚集而无法获得足够的营养，最终造成种瘤失败，或肿瘤团块造成营养供应不足，以及小鼠膀胱癌模型中的皮下瘤模型无法使用药物灌注的方式，不能准确评价药物灌注的副作用和疗效，移植瘤模型死亡率高，自发成瘤模型建模周期过长的问题，本发明提供了用于构建膀胱癌模型的细胞悬液，气囊的制备方法、气囊膀胱癌模型构建方法及小鼠气囊膀胱癌模型的构建方法，气囊膀胱癌模型可以采用药物灌注的方式，可以准确评价药物的疗效和副作用，同时该模型成瘤率高、死亡率低，模型构建时间短，采用的技术方案如下：

本发明的目的在于提供一种生物微乳液小胶束，该生物微乳液小胶束是通过如下步骤进行制备的：

1)将氨基的树状大分子PAMAM用促肿瘤生长液配置成10％(质量)的PAMAM溶液；所述促肿瘤生长液是将VEGF人重组蛋白和Endocan人重组蛋白加入到DMED培养液中配置成促肿瘤生长液；