[发明专利]一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用

说明书

本发明属于核酸保存技术领域，尤其涉及一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用。本发明提供了一种组合物，组合物的原料包括：渗透性保护剂、稳定剂、离子通道阻断剂以及抗凝剂。本发明还提供了一种上述组合物的制备方法，本发明还提供了一种上述组合物或上述制备方法得到的产品在全血游离DNA保存领域的应用。经模拟运输检测以及实验检测可得，本发明提供的技术方案制得的产品，在模拟运输的实验条件下，可有效的稳定血细胞膜，减少红细胞和白细胞的破裂，同时，对于全血游离的DNA起到良好的保护作用，进一步地，确保了将全血游离DNA用于临床检测时，其检测结果的准确性和可靠性，拓宽了全血游离DNA在临床的应用范围。

技术领域

本发明属于核酸保存技术领域，尤其涉及一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用。

背景技术

自从1948年游离DNA被首次发现以来，随着分子检测技术的发展，人们发现游离DNA的水平和组成与多种疾病密切有关。游离DNA作为一种生物标志物，逐步应用于疾病的早期诊断、预后以及监测各领域，尤其在肿瘤诊断与无创产前筛查领域最为成熟。离体血液中的游离DNA受到巨噬细胞清除、酶降解、有核细胞的释放等多种因素的影响，无论是数量和种类，都会在样本储存过程中发生变化，影响检测结果的准确性。

为了最大程度的减少游离DNA的离体变异，降低储存和运输成本，在应用过程中需要特殊的保存液，发挥下述三种作用：1、抑制DNA酶的活性，保护游离DNA不降解；2、抑制巨噬细胞活性，防止巨噬细胞对游离DNA的清除；3、维持细胞完整性，减少细胞的凋亡和坏死，防止基因组DNA释放，造成的背景污染。现有技术中，目前常采用的EDTA抗凝血血浆提取游离DNA，对温度和储存时间都有严格的贮存条件，极大的限制了临床的使用。

因此，研发出一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用，用于解决现有技术中，游离DNA对于温度和储存时间都有严格的贮存条件，极大的限制了临床应用的技术缺陷，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用，用于解决现有技术中，游离DNA对于温度和储存时间都有严格的贮存条件，极大的限制了临床应用的技术缺陷。

本发明提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：渗透性保护剂、稳定剂、离子通道阻断剂以及抗凝剂。

优选地，以质量份计，所述组合物的原料包括：渗透性保护剂0.05～1份、稳定剂5～50份、离子通道阻断剂1～10份以及抗凝剂8～16份。

优选地，以质量份计，所述组合物的原料包括：渗透性保护剂0.1份、稳定剂20份、离子通道阻断剂5份以及抗凝剂10份

优选地，所述渗透性保护剂为DMSO和/或甘油。

优选地，所述稳定剂为肌醇和/或海藻糖。

优选地，所述离子通道阻断剂选自：四乙胺、4-氨基吡啶、奎尼丁、奎宁、氯化钡、DIDS以及NPPB中的一种或多种。

优选地，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾和/或乙二胺四乙酸三钾。

本发明还提供了一种包括以上任意一项所述组合物的制备方法，所述制备方法为：

步骤一、稳定剂、离子通道阻断剂以及抗凝剂混合得第一混合物，加水搅拌得第一产物；

步骤二、所述第一产物与渗透性保护剂混合得第二混合物，加水搅拌，通过滤膜过滤后得产品。

优选地，步骤一中，所述第一混合物与水的质量投料比为(17～64)：(60～90)；

步骤二中，所述第二混合物与水的体积投料比为(4～12)：(1～4)。