[发明专利]一种脂肪干细胞提取方法

说明书

本发明公开了一种脂肪干细胞提取方法。所述方法包括如下步骤：A、预处理脂肪组织；B、向所述预处理后的脂肪组织加入I型胶原酶进行消化；C、消化预定的时间后，收集位于下层的已消化的脂肪细胞；D、吸取位于上层的未消化脂肪细胞以及I型胶原酶重新进行消化；E、重复执行步骤C和步骤D，直至所述预处理后的脂肪细胞被消化完全；F、培养若干代所述已消化的脂肪细胞，获得传代细胞；G、收集所述传代细胞并进行若干项细胞检测；H、在所述细胞检测项目合格后，将所述传代培养细胞转移至细胞种子库中存储。通过分步消化的方式，可以有效的降低消化时间对于脂肪干细胞活性的影响，提高脂肪干细胞的细胞得率或者含量。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种脂肪干细胞提取方法。

背景技术

干细胞是人体及其各种组织细胞的最初来源。其具有高度自我复制、高度增殖和多向分化的潜能。干细胞研究正在向现代生命科学和医学的各个领域交叉渗透，干细胞技术也从一种实验室概念逐渐转变成能够看得见的现实。干细胞研究己成为生命科学中的热点，其对于人类的疾病的治疗等具有非常重要意义。

脂肪干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。脂肪干细胞是一种足量的、可用于实际的、有一定吸引力的自体细胞代替的供体资源，并能够广泛的用于组织修复、再生、发育的可塑性及细胞治疗等研究中。

在现有的脂肪干细胞分离获取步骤中，通常可以包括：对脂肪组织的物理处理、消化以及传代培养扩增等几个步骤。

在实现本发明的过程中，申请人发现现有技术中存在如下问题：在分离获取过程中，由于需要加入相应的消化酶进行消化，需要充分长的消化时间才能实现脂肪组织样本的完全消化。而在消化时间过长时，会导致细胞损伤较大的问题，影响细胞得率及后期培养。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种脂肪干细胞提取方法，旨在解决现有技术中脂肪组织消化时间过长，导致细胞损伤大，影响后期培养和细胞得率的问题。

为了达到上述目的，本发明实施例第一方面提供一种脂肪干细胞提取方法。所述方法包括如下步骤：

A、预处理脂肪组织；

B、向所述预处理后的脂肪组织加入I型胶原酶进行消化；

C、消化预定的时间后，收集位于下层的已消化的脂肪细胞；

D、吸取位于上层的未消化脂肪细胞以及I型胶原酶重新进行消化；

E、重复执行步骤C和步骤D，直至所述预处理后的脂肪细胞被消化完全；

F、培养若干代所述已消化的脂肪细胞，获得传代细胞；

G、收集所述传代细胞并进行若干项细胞检测；

H、在所述细胞检测项目合格后，将所述传代培养细胞转移至细胞种子库中存储。

可选地，所述步骤A具体包括：

A1、获取脂肪组织样本；

A2、使用生理盐水清洗所述脂肪组织样本；

A3、将所述清洗后的脂肪组织样本分装至若干支离心管并剪碎。

可选地，所述步骤A2具体包括：

A21、将脂肪组织样本分装至若干支离心管中；

A22、向离心管中加入生理盐水以补充至预定的体积；

A22、使用移液管反复吹打在所述离心管内的脂肪组织样本；

A23、将离心管放入离心机中离心10分钟，转速为1500rpm；

A24、弃去离心管内的中下层液体；