[发明专利]利用花药培养快速选育广亲和水稻材料的方法

权利要求书

1.利用花药培养快速选育广亲和水稻材料的方法，包括下述步骤：

1.1、花药培养再生植株的获得

（1）预处理：新鲜水稻幼穗，75%酒精表面消毒后，用保鲜膜包好幼穗，4℃冰箱中预处理7-10天；

（2）诱导培养：预处理结束后，剥去多余叶片和叶鞘，留取发育适宜的带枝小穗，装入无菌烧杯中，先用75%酒精表面消毒30s，再用0.1%升汞溶液浸泡10-12 min，并用无菌水冲洗3-4次，每次1-2min，最后用无菌滤纸吸干小穗水分；在超净工作台上从颖壳基部1/3处剪断花丝，将花药抖落至诱导培养基上，每个三角瓶接种80-100个花药，25-28℃暗培养；

所述的诱导培养基为N6+2，4-D 2.0-3.0mg/L+KT 0.5-1.5mg/L +NAA2.0-3.0 mg/L +蔗糖30-50g/L；

（3）分化培养及生根：愈伤组织直径达到2mm时将其转移到分化培养基，25-28℃、1000-1500Lx、10-12h/d光照培养直至分化成绿苗；当绿苗长到5cm时，在超净工作台上将绿苗转移到生根培养基上进行生根；

所述的分化培养基为：MS+KT 2.0-3.0 mg/L +6-BA2.0-3.0mg/L +NAA 0.2-0.8 mg/L +IAA0.2-0.8mg/L +蔗糖30 g/L；

所述的生根培养基为：1/2MS+NAA0.5-1.0 mg/L+活性炭0.8-1.0 g/L+蔗糖20 g/L；

1.2、纯合DH系的获得

将根系发育良好的再生植株经过炼苗后大田移植，每个愈伤组织来源的植株单株收种，每个单株获得的种子次年种成株系，通过田间农艺性状调查，选取田间农艺性状纯合株系10-30个；结合室内考种，选取农艺性状优良结实率高丰产性好的DH系5-15个；

1.3、广亲和水稻材料的获得

针对广亲和基因S5ⁿ设计引物，对选取的DH系进行PCR检测，筛选具备该基因的植株，即得。

2.根据权利要求1所述的方法，所述的水稻的品种为水稻甬优系列籼粳杂交稻品种。

3.根据权利要求1所述的方法，所述的新鲜水稻幼穗的获取方法为：于晴天的下午取单核靠边期的幼穗，为保证幼穗新鲜，取样时幼穗留2节及2-3片叶片，放在盛有清水的桶中；

取好的幼穗在室内显微镜下观察花粉母细胞发育时期，花粉发育处于单核靠边期的幼穗叶枕距8-10cm，此时幼穗的颖壳宽度已接近成熟的大小，颖壳呈现淡绿色，雄蕊伸长达颖壳的1/3－1/2；田间取回的幼穗，在实验室里重新修剪，保留幼穗2叶及1节，75%的酒精表面消毒后，用保鲜膜包好幼穗，放在4℃冰箱中预处理7-10天。

4.根据权利要求1所述的方法，针对广亲和基因S5ⁿ设计的正向引物序列为5’-ATCAACCCATTTCCTTTCCT-3’，反向引物序列为5’- ATACGCTCGATCGGATTAAC -3’。

5.根据权利要求1所述的方法，所述的水稻的品种为甬优1540。