[发明专利]检测SMAD4基因V354L位点突变的试剂盒

说明书

本发明涉及检测SMAD4基因V354L位点突变的试剂盒，包括：检测SMAD4基因V354L(c.1060G>C)位点突变的特异引物，所述特异性引物的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述特异引物的下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次揭示了SMAD4基因V354L(c.1060G>C)位点突变与接受辅助性化疗的非小细胞肺癌患者预后密切相关，并根据该发现设计出检测试剂盒，为非小细胞肺癌患者个体化的辅助性化疗提供指导。

技术领域

本发明涉及一种检测SMAD4基因V354L位点突变的试剂盒，属于生物技术和医学技术领域。

背景技术

SMAD4是一种抑癌基因，常见于胰腺癌和结肠癌。转化生长因子β(TGF-β)调节着细胞生长、分化以及多种生理、病理过程，TGF-β与SMAD4构成的信号通路与肿瘤的发生机制密切相关，SMAD4在该信号通路中发挥着核心作用。相关研究发现，SMAD4基因的缺失或突变与肿瘤细胞的侵袭、淋巴结转移以及肿瘤血管形成密切相关。SMAD4基因的缺失还可以促进肺癌的发生与发展，当SMAD4基因被敲除后，肺癌细胞对DNA拓扑异构酶抑制剂的敏感性增强。

Taqman探针是一种荧光检测技术，用含有特异序列的荧光标记探针来检测PCR产物，Taqman探针的出现使得定量PCR技术的特异性有了很大提高。该特异性的荧光探针在两条引物之间与模板特异性地结合。在探针的5’端标记有荧光报告基团如FAM、VIC等，在探针的3’端标记荧光淬灭基团。当探针完整时，仪器检测不到荧光信号，因为报告基团发射的荧光信号会会被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，Taq DNA聚合酶会酶切降解与模板相结合的探针，导致3’端淬灭基团与5’端报告基团分离，仪器就可以检测到荧光信号。

目前发明一种能够快速检测患者SMAD4基因V354L(c.1060G>C)位点突变的方法，进而有助于指导非小细胞肺癌患者辅助性化疗方案的选择，成为急需解决的问题。

发明内容

本发明针对现有技术在检测SMAD4基因V354L(c.1060G>C)位点突变时所表现出的缺点，提供一种准确、快速、廉价的检测SMAD4基因V354L(c.1060G>C)位点突变的试剂盒。

发明概述

发明人采用二代高通量测序技术检测到SMAD4基因V354L(c.1060G>C)突变位点，并通过统计学方法分析发现了接受辅助性化疗的肺癌患者的预后与SMAD4基因V354L(c.1060G>C)位点突变密切相关。在所有检测到SMAD4基因V354L(c.1060G>C)位点突变的IIB or IIIA期非小细胞肺癌患者中，接受卡铂联合多西他赛的辅助性化疗方案相比于卡铂联合长春瑞滨，患者的无病生存期(DFS)以及总生存期(OS)显著延长。然而在所有SMAD4基因该位点没有发生突变的IIB or IIIA期非小细胞肺癌患者中，卡铂联合多西他赛方案或者卡铂联合长春瑞滨方案，对患者预后的影响无统计学差异。根据上述发现，发明人根据实时荧光定量PCR检测方法，设计出一种检测SMAD4基因V354L(c.1060G>C)位点突变的试剂盒，该试剂盒能够准确、快速地检测SMAD4基因该位点的突变，并且操作较为简便，成本相对廉价。

发明详述

检测SMAD4基因V354L位点突变的试剂盒，包括：

检测SMAD4基因V354L(c.1060G>C)位点突变的特异性引物，所述特异性引物的上游核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

根据本发明优选的，上述试剂盒，还包括：